新项目方法能力验证报告(水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法).docxVIP

XXXX 新工程方法验证能力验证报告 水质粪大肠菌群的测定多管发酵法HJ 347.2-20XX 水质粪大肠菌群的测定多管发酵法HJ 347.2-20XX 负责人： 审核人： 日期： 水质 粪大肠菌群的测定多管发酵法HJ 347.2-20XX 方法验证能力验证报告=1 方法验证能力验证报告 =1 1、方法依据及适用范围 本报告依据：水质粪大肠菌群的测定多管发酵法HJ 347.2-20XX制 定。 该方法的适用范围：地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠 菌群的测定。 2、定义 将样品参加含乳糖蛋白月东培养基的试管中，37口初发酵富集培养，大肠 菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸、产气，产生的酸使漠甲酚紫指示 剂由紫色变为黄色，产生的气体进入倒管中，指示产气。44.5口复发酵培养, 培养基中的胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长，最后产气的细菌确定为 是粪大肠菌群。通过查MPN表，得出粪大肠菌群浓度值。 3、主要仪器、设备及试剂 4.1培养基与试剂 乳糖蛋白腺培养液 10g5g3g 10g 5g 3g 5g lOOOmL ImL 乳糖 牛肉膏 氯化钠 蒸馅水 漠甲酚紫乙醇溶液（P=16g/L） 贮备培养基：将蛋白月东、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于1 OOOmL蒸保水 中加热溶解，用氢氧化钠溶液(15.3.2)或盐酸溶液(15.3.3)调pH为7.2 7.4,再参加ImL漠甲酚紫乙醇溶液(p=16g/L),充分混匀，分装于装有 倒管的试管中，置高压蒸汽灭菌器中，以115°C灭菌20 min,贮于冷暗处。 培养基 TOC \o 1-5 \h \z 胰豚 20g 乳糖 5g 胆盐三号 1.5g 磷酸氢二钾(K2HPO4) 4g 磷酸二氢钾l-5g 氯化钠 5g 蒸f留水 1 OOOmL 将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高压蒸 汽灭菌器中，115口灭菌20min,灭菌后pH应为6.9。 无菌水口取适量实验用水，经121口高压蒸汽灭菌20 min,备用。 硫代硫酸钠(Na2S2O35H2O)。 乙二胺四乙酸二钠(C10Hi4N2O8Na2.2H2O)。 硫代硫酸钠溶液Dp (Na2S2O3)=0.10 g/ml 称取15.7 g硫代硫酸钠，溶于适量水中，定容至100 ml,临用现配。 乙二胺四乙酸二钠溶液Dp (C10H14N2O8Na2.2H2O) =0.15 g/ml 称取15g乙二胺四乙酸二钠，溶于适量水中，定容至100 ml,此溶液 可保存30 do 3.1仪器 恒温恒湿培养箱。 采样瓶：IL、500mL或250mL带螺旋帽或磨口塞的广口玻璃瓶。 3.2.3 天平，感量 O.OOlgo 过滤装置。 3.2.5 pH 计。 培养皿。 iWj压灭菌锅。 试管：300mL、50mL、20mL。 4、分析过程 4.1实验步骤 4.1.1 15 管法 将样品充分混匀后，在5支装有已灭菌的5ml三倍乳糖蛋白腺培养基 的试管中（内有倒管），按无菌操作要求各参加样品10mb在5支装有已 灭菌的10ml单倍乳糖蛋白豚培养基的试管中（内有倒管），按无菌操作要 求各参加样品Imb在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白豚培养基的试 管中（内有倒管），按无菌操作要求各参加样品O.lmL对于受到污染的样 品，先将样品稀释后再按照上述操作接种，以生活污水为例，先将样品稀 释104倍，然后按照上述操作步骤分别接种10ml、1ml和O.lmL当样品接 种量小于1ml时，应将样品制成稀释样品后使用。按无菌操作要求方式吸 取10ml充分混匀的样品，注入盛有90ml无菌水的三角烧瓶中，混匀成1:10 稀释样品。吸取1:10的稀释样品10ml注入盛有90ml无菌水的三角烧瓶中， 混匀成1:100稀释样品。其他接种量的稀释样品依次类推。样品接种量参考 表见表4-1 o 表4-1 接种量参考表 样品类型 接种量（ml） 10 1 0. 1 10-2 10-3 10-4 10—5 地表水 水源水 ▲ ▲ ▲ 湖泊（水库） ▲ ▲ ▲ 河流 ▲ ▲ ▲ 废水 生活污水 ▲ ▲ ▲ 工业废水 处理前 ▲ ▲ ▲ 处理后 ▲ ▲ ▲ 地下水 ▲ ▲ ▲ 4.1.2 12 管法 将样品充分混匀后，在2支装有已灭菌的50ml三倍乳糖蛋白月东培养基 的大试管中（内有倒管），按无菌操作要求各参加样品100ml,在10支装 有己灭菌的5ml三倍乳糖蛋白豚培养基的试管中（内有倒管）,按无菌操 作要求各参加样品lOmlo 初发酵试验 将接种后的试管，在37口±0.5口下培养24h±2h。发酵试管颜色变黄为 产酸，小玻璃倒管内有气泡为产气。产酸和产气的试管说明试验阳性。如 在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。 复发酵试验 轻微振荡在初发酵试验中显示为阳性或疑似阳性