长春理工大学微生物实验报告酵母菌的观察.docxVIP

实验题目 酵母菌观察及死活细胞的鉴定实验 学 生 姓 名 李慧星 实验地点 南区实训楼817 学 院 生命科学与技术学院 实验日期 2021年4月29日星期四 班 级 学 号 190821133 实验课程 微生物学 同 组 人 王乐，冯洋 环境参数 成 绩 实验目的或要求 ?了解酵母培养基的特点以及酵母的培养方法。 ?学习并掌握酵母制片方法，观察酵母的个体形态及死活细胞区分。? 学习掌握观察酵母的出芽生殖方式。? ?学习掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。? 5.?学习和掌握酵母的菌落形态特征。?? 二、实验原理 1.酵母菌形态：是多形的、不运动的单细胞真核微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。?酵母菌繁殖：繁殖方式也比较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性生殖是通过质配、核配和减数分裂而产生的子囊孢子 2.子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。? 3.?美蓝染色?本实验通过美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。?美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。 三、实验仪器设备及材料（试剂） 1.菌种：酵母菌； 2.试剂：???0.1%吕氏碱性美蓝溶液、0.1%生理盐水?????? 3.?仪器及其它用品：???普通光学显微镜、酒精灯、盖玻片、载玻片、接种环、胶头滴管、镊子。 四、操作方法与实验步骤 1、酵母菌制片与简单染色--美蓝染液水浸片法???? ?1)滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作用接种环由酿酒酵母麦芽汁斜面培养物挑取少许菌体置于染液中，混合均匀。?2)用镊子取一盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。?3)将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死细胞和活细胞。?4)染色30min后，再次观察，注意死活细胞的比例是否发生变化。 实验数据记录及处理 由最后一图油镜下观察结果可以清晰的看出，细胞染成蓝色即为死细胞，其他则为活细胞。并且在图中产生芽孢的酵母细胞也已经标出。 六、实验结果分析及讨论 在实验初期，由于酵母细胞刚刚从培养基中提取出来制成观察片，时间尚短，因此酵母细胞存活率较高，几乎未发现有死亡的酵母细胞。而随着观察时间的延长，被染成蓝色的酵母细胞在不断增加，因此死细胞也在增加。由于美兰染液为活性染料，因此在观察酵母细胞时可以直观的观察到酵母细胞的运动以及芽孢出芽的过程。通过将酒精灯靠近光学显微镜的附近，使酵母菌周围环境温度升高，可以看到随着时间增加，温度升高，酵母菌染色加速。 思考题 你使用哪种方法加速酵母菌的死亡？ 通过升高环境温度来加速酵母菌的死亡。 2.在显微镜直接测定微生物数量有什么优缺点? 优点：方便简单，时间短，不需要等待微生物培养过程。 缺点：由于观察到的微生物，无法知道它的种类，无法鉴别它，所以微生物的总量是样品中所有微生物的总量。因此，检测酵母菌培养液中酵母菌的浓度，如果培养液被污染，培养液中也就有了其他微生物，直接观测的结果就有了很大的误差。 3.血球计数板可以用于细菌的计数？ 不能。因为血球计数板只适用于细胞比较大的单细胞微生物，像酵母菌和孢子等，而细菌太小，显微镜下数不清。 八、这个实验过程中你都做了哪些工作？目的都是什么？ 在本次实验过程中，我进行了酵母细胞观察与染色实验的全过程操作，通过制片操作，重新复习了制片操作，并且再次熟悉了光学显微镜的使用以及对酵母菌细胞形态的观察。