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高中生物选修 3 知识点总结 专题 1 基因工程 基因工程的概念： 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 DNA 重组和转基因技术， 赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要 的新的生物类型和生物产品。基因工程是在 DNA 分子水平上进行设计 和施工的，又叫做 DNA 重组技术。 基因工程的原理：基因重组 （一）基因工程的基本工具 1. 分子手术刀“ ”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1 ）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2 ）功能： 能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列， 并 且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开， 因此具 有专一性。 （3 ）结果：经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式： 黏性末端和平末端。 2. 分子缝合针“ ”——DNA 连接酶 (1) 两种 DNA 连接酶（ E ·coliDNA 连接酶和 T4-DNA 连接酶）的比 较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别： E ·coliDNA 连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链 DNA 片 段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而 T4DNA 连接酶能缝 合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2) 与 DNA 聚合酶作用的异同 : DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形 成磷酸二酯键。 DNA 连接酶是连接两个 DNA 片段的末端，形成磷酸二 酯键。 3. 分子运输车“ ”——载体 （1 ）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源 DNA 片段插入。 ③具有标记基因，供重组 DNA 的鉴定和选择。 （2 ）最常用的载体是质粒 ,它是一种裸露的、结构简单的、独立于 细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状 DNA 分子。 （3 ）其它载体： λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 (二)基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取 1. 目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。 2. 原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目 的基因的常用方法有反转录法 _ 和化学合成法 _ 。 3.PCR 技术扩增目的基因 （1 ）PCR 的含义：是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸 合成技术。 （2 ）目的：获取大量的目的基因 （3 ）原理： DNA 双链复制 （4 ）过程：第一步：加热至 90 ～95 ℃DNA 解链为单链； 第二步：冷却到 55 ～60 ℃，引物与两条单链 DNA 结合； 第三步： 加热至 70～ 75 ℃，热稳定 DNA 聚合酶从引物起始进行互 补链的合成。 （5 ）特点：指数 (2n) 形式扩增 第二步：基因表达载体的构建 (核心 ) 1. 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存