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— PAGE \* Arabic 1 — 表面等离子体共振 表面等离子共振技术（Surface 张颖娱 综述Plasmon Resonance SPR）学号生物物理系 E=E(0)exp〔-[-εm2εm+εd]1/2zλ〕 (5)可见,当电磁场沿着金属表面传播,其衰减场按指数规律衰减。根据 MAXWELL 方程,激励 SP 需要满足: (1) 绝缘体的介电常数为正实数; (2) 金属薄膜的介电常数为负; (3) 金属薄膜的介电常数的模大于虚部,因为虚部决定了等离子的衰减速度。 对于表面等离子与外部电磁辐射耦合，目前有三种理论模型： （如图 3 所示） (a) 衍射光栅型; (b) Otto 结构:具有高折射率棱镜和半无限电介质,其间存在狭缝,这种方法在实践中不方便; (c) Kretschmann 结构:用金属薄膜来取代半无限电介质,在某个角度,入射到薄膜上的光波矢量与 表面等离子体波矢量的频率相同,光的能量便能有效的传递给表面等离子体。Kretschmann 结构实现起来相当方便,从而引起了广泛关注。目前,大多数的研究都以此为基础;衍射光栅 型的研究受到微细加工工艺的限制,研发工作开展的相对较少。同时，由于表面缺陷会造成表面等离子的锥 形辐射，所以 SPR 共振型传感器对金属薄膜要求较高。 2 SPR 生物传感器的结构：. SPR 型生物传感器主要包括光波导器件、金属薄膜、生物分子膜三个组成部分。其关键在于金属薄膜 和生物分子膜的沉积。金属薄膜通常采用银膜，但是对于光纤型的传感则更多的使用金膜。膜厚度通常为 60－90nm。 生物分子膜的成膜方法包括，金属膜直接吸附法、共价连接法、单分子复合膜技术。目前又出现了软 光刻新技术（又称为分子印膜技术） ，用于分子水平上构造敏感表面。 基于 SPR 的传感器，其传感机制分析可以分为两个部分： （1） SPR 的电磁场效应分析； （2） 生物大分子相互作用对介电物质的影响。传感过程如图 1 ：图 1 传感器机理示意 表面等离子共振的生物传感系统与其他光生物传感器系统一样，需要光源、光路、光电耦合器件或光 谱分析设备、反应池、液流控制系统。光源有 He—Ne 激光器、半导体激光器、发光二极管等。光电耦合 器件主要有光电二极管、CCD 等。光路往往采用棱镜组或光纤构造。 3 SPR 的应用生物分子相互作用分析(biomolecular interaction analysis,BIA)正是基于 SPR 这一原理,将探针或 配体固定于传感器芯片镀着的金膜表面,含分析物的液体流过传感片表面,分子间发生特异性结合时可引起 传感片表面折射率的改变,通过检测 SPR 信号改变而监测分子间的相互作用。 在ＳＰＲ-ＢＩＡ的实时监测中,我们可以获悉:(1)特异性—哪些分子发生了相互作用?(2)浓度—存在 多少结合分子?(3)动力学—相互作用的速率、结合和解离的比例是多少?(4)亲和性—相互作用的程度有多 大?(5)协同作用—是否存在任何异构效应?(6)相互作用模式—结合模式与不同样品是否存在对应关系? 3.1 SPR 技术在蛋白质组学中的作用 生物分子相互作用分析质谱质谱(ＢＩＡ-ＭＳ)是ＳＰＲ-ＢＩＡ技术与传统的蛋白鉴定技术ＭＡＬＤＩ -ＴＯＦ-ＭＳ(基质辅助的激光解吸离子化时间飞行质谱)有机结合形成的一种新的研究手段。ＢＩＡ-ＭＳ 分为两步:第一步,ＳＰＲ检测自身环境中的生物分子;第二步,ＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ-ＭＳ鉴定结合在ＳＰＲ传 感器表面的分析物。这种方法综合了ＳＰＲ-ＢＩＡ和ＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ-ＭＳ两种技术的优势,实现了定量 与定性的结合。 ＢＩＡ-ＭＳ在研究蛋白质复合物组分间相互作用的动力学参数、利用结合位点结构的研究筛选功能性 的突变、通过依次结合事件的分析揭示重要的生理分子级联反应机制、研究任何蛋白质间的相互作用等方 面具有广泛的用途,是蛋白质组学中研究的有力工具。 (1)蛋白间相互作用方面的研究:利用ＢＩＡ-ＭＳ可以筛选和鉴定感兴趣的蛋白及与 结合的对象,这是 ＢＩＡ-ＭＳ的一个主要应用领域。例如采用ＢＩＡ与基因标签技术进行蛋白质的鉴定。实验将表达标签基 因融合入未知基因中,通过标签基因的表达来检测痕量表达的靶蛋白。 靶蛋白的分子量由ＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ 在传感器芯片表面直接测定,并经序列资料库的搜寻核实、鉴定。由此可见,ＢＩＡ-ＭＳ在选择性回收靶蛋 白中具有特异性和极高的敏感性,并能有效区别靶和非靶物质。另外,利用抗原抗体反应,ＢＩＡ-ＭＳ还可用 于食物中一种或多种细菌毒素的检测。有研究报道采用ＢＩＡ-ＭＳ技术在牛奶、蘑菇等食品中快速实时检 测出葡萄球菌肠毒素和毒素休克综合征毒素Ｉ。 (2) 蛋白结构与