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肝组织中DNA含量的测定
【目的要求】
1. 熟悉DNA含量测定的原理
2. 了解二苯胺测定脱氧核糖的原理和方法
【原理】
DNA 中的脱氧核糖以二苯胺法测定之。脱氧核糖在酸性条件下脱水生成ω-羟基-
γ-酮基戊醛，后者与二苯胺反应生成蓝色的物质，在595nm处有最大吸收。当
待测样品中DNA含量在10~150mg/ml范围内时，O.D值与DNA浓度成正比。用分
光光度计测得反应液O.D值，即光密度（特定波长下的吸光度）从而可知样品中
RNA 的含量。反应式如下：
【仪器与试剂】
仪器：
751分光光度计，721分光光度计，恒温水浴箱。
试剂：
5%HClO4 、20%HClO4、4%二苯胺冰醋酸溶液、DNA标准液（100μg/ml）
【实验步骤】
1. 取实验一含DNA 的溶液直接作为待测样品液，无需稀释。
2. 按表操作（请严格按照表格确定试剂添加顺序）
标准管 待测管 空白管
DNA标准液（ml） 2.0 —— ——
（100μg/ml）
待测样品液（ml） —— 2.0 ——
蒸馏水（ml） —— —— 2.0
20%HClO4 （ml） 2.0 2.0 2.0
二苯胺试剂（ml） 2.0 2.0 2.0
混匀各管，60℃水浴30min
3. 待各管冷却后，以空白管调零点，以595nm 比色，读取光密度（O.D）值。重
复测量3-5组数据，取平均值。
4. 计算每克肝组织中DNA 的含量,单位为微克/每克肝组织。
【思考题】
如何根据数据计算出DNA 的含量，请写出公式，解释意义并将其含量计算出来。
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