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〈1117 〉微生物实验室规范 引言 微生物实验室规范包括以下方面：无菌保障技术，培养基质控，实验用菌株质控，仪器设备 质控，严格的记录程序，实验室数拟评估体系以及实验室人员培训制度。由于微生物测定数据的 不可重复性和变异性是客观存在的，所以客观公正的方法和严格执行 GLP规范是保证微生物实 验数据时可信和重现的重要前提。 培养基的配制和质量控制 培养基配制 绝人多数的微生物实验需要用到培养基。供微生物实验室用的培养基的质量控制是微生物实 验室正常运转的保障。通过控制培养基配制、贮藏条件和质量测试环节，实现对 “微生物实验室 专用培养基”质量控制。 选择正确的成品培养基，或基于文献或使用公认的配方，正确选择培养基组分对于微生物实 验是至关重要的。培养基生产商提供的培养基产品都应具有培养基配方和使用说明， 且这些信 息仅是针对脱水培养基或预制培养基产品制定。通常，不同种类的培养培养基可能会有不同制剂 方法，例如加热、使用添加组分、调节 pH等。所以为了保证培养基质量, 必须按照产品说明书 要求配制培养。预制培养基必须明确标识其失效期和保存条件，同时也得满足该培养基 “促生长 实验”和“选择性实验”中涉及的质控菌株的生长要求。 水是微生物用培养基配制中最常用的配制溶剂。通常用纯化水，在某些特殊情况下也使用去 离子水和蒸馏水配制培养基。严格记录配制各种培养基所用水的体积。 准确称量脱水成品培养基成培养基的各组分，是培养基配制重新性的保证。称量培养基的天 平需经过严格的校准，并且满足称量量程的要求（参见分析天平称量要求1251）。 必须保证 称量容器和工具（如称样勺）的洁净程度，以避免外源物进入从而造成培养基组成的改变。严格 记录称样重量。 脱水培养基在灭菌和分装之前，需保证培养基组分在水中充分分散均匀。由于培养基有一定 的热敏感性，因此对于必须加热溶解的培养基，要特别注意不宜过度加热。培养基配制过程中使 用到的仪器，必须具备温度可控、恒压和可充分混匀的特点。培养基颜色变深 （多为梅拉德反应 或非酶褐变反应）通常是加热过度的指征。当培养基需要添加某组分时，应保证加入的组分在培 养基中充分分散均匀。 如果配制培养基的玻璃容器洁净程度不够.就可能向培养基中引入抑菌物质。由玻璃容器不 洁净引入的抑菌物质，主要是玻璃器皿清洗后残留的去垢剂，或是前一次使用后残留的有抑菌性 的样品。所以，必须严格设定清洗程序以去除残留的污染物和外源性成分，确保使用纯化水彻底 清除残留的去垢剂。具体参见“玻璃器皿清洗法1051 ”中的相关指导原则。 培养基的灭菌程序，应该严格按照生产商提供的灭菌条件和参数进行，使用者也可以采自行 验证过的来菌程序灭菌。商品化的预制培养基必须提供该培养基采用的灭菌参数文件。如果企业 能够提供某公认的生物指示剂条件下，该培养基的无菌保障水平（ SAL），那其灭菌参数就更有 实际意义。高压蒸汽灭菌是常用的灭菌技术，但是当培养基中有热不稳定的组分时，则应采用煮 沸的方式灭菌。当然，对于某些特殊的培养基，薄膜过滤除菌是更为有效的灭菌方式。 具体培养基灭菌方法和参数的有效性，需要通过“培养基无菌性”和 “培养基的促生长实验” 来证明。此外，在选定载荷量和载样体积条件进行湿热灭菌时，高压灭菌程序应通过验证保证合 理的热分布，以达到灭菌的目的。通常， 生产商邰推荐“121℃，15分钟”的灭菌条件，前提 是高压灭菌锅已经通过验证程序的检查，所谓参数，也就是某培养基的灭菌时间和温度。由于灭 菌锅的装载量与方式影响加热速率，当载样量大时通常需要延长灭菌时间，灭菌时间应根据培养 基的体积和和高压灭菌锅的装载情况而变化。升/降温速率太慢的灭菌锅可能会导致培养基过度 加热。因此，只能通过灭菌程序验证过程，才能实现对上述环节的合理控制，制定出符合要求的 最低无菌保障水平（SAL），既能满足培养法的灭菌要求，又可避免由于加热过度导致的培养基 降解变化。湿热灭菌结束，待高压锅冷却后应立即取出培养基，不宜在高压灭菌锅中存放培养基。 无论对于商品化培养基还是实验室自制培养基，不适宜的加热、灭菌参数都可能导致培养基颜色 变化、澄明度下降、凝胶强度改变或是 pH值偏离厂商提供的酸度范围。 每批培养基的酸度都应在灭菌后，冷却至室温（ 25℃