遗传性疾病的分子诊断12am.pptxVIP

DNA;遗传性疾病分子诊断;遗传性疾病诊断策略; 1. 点突变的诊断 ;一、限制性内切酶法（RE法） ;×;;;;;PCR-SSCP; 2.片段性突变的检测;杜氏和贝氏肌营养不良症的基因诊断;遗传性疾病诊断策略; DNA多态（DNA Polymorphism）： 群体中每个个体DNA区域中等位基因（或片段）存在两种或两种以上的形式，对基因功能没有影响，称DNA多态。 它通过孟德尔方式遗传。常用做遗传分析中的标记。; 将与致病基因连锁的某种多态性标志作为遗传标志，在同一个家系成员中探查是否存在致病基因的方法???为基因连锁分析法。 ;常用的遗传性多态性标记有3类：;;;1 Southern blot--RFLP诊断(PKU);患者为19kb片段的纯合子,说明患者缺陷的PAH 基因与19kb片段连锁 其父、母亲缺陷的PAH基因与19kb片段连锁， 其23kb片段与正常PAH基因连锁。 II2为23kb 和19kb片段的杂合子，为表型正常的致病基因携带者。;数目变异串联重复variable number tandem repeats, VNTR;VNTR两侧酶切位点固定，但两酶切点之间的串联重复拷贝数不同，酶切后产生不同长度的片段。 DNA多态可以通过PCR扩增后电泳来检出，称扩增片段长度多态（amplified fragment length polymorphism, Amp-FLP）;VNTR 酶切，电泳后的检测结果;PCR-VNTR检测;PCR-VNTR;成年型多囊肾病的诊断; 以3`HVR为探针，与PvuII酶切后的家系有关成员的基因组DNA进行Southern Blot ; 1 2 1 2 3 4 5  5.7kb 3.4kb 2.3kb ;结果分析;单核苷酸多态 Single Nucleiotide Polymorphism， SNP; 遗传性疾病的主要分子机理是基因突变，因而是基因诊断的最佳适应症。;血红蛋白病 最早成功进行产前基因诊断;;×;;; a-地中海贫血： 不同数量(1-4个)a-珠蛋白基因缺失或点突变等 a a ? 14kb BamHI BamHI aa/aa aa/-- aa/a- a-/-- --/-- 10kb 14kb 10kb a;b-地中海贫血 主要是b-珠蛋白基因点突变。 突变常不涉及限制酶识别位点 不能用限制性酶切图谱进行直接分析。 诊断方法： RFLP连锁分析 间接检测病变基因 ASO 斑点印迹杂交分析 直接检测病变基因点突变 DNA芯片（包括各种基因突变位点的所有探针） 可快速、简便地检出所有已知突变 ; 甲型血友病（血友病A） 凝血因子VIII（F VIII）缺乏所致， 发病的分子机制是F VIII基因突变，主要为点突变或少数硷基 的缺失和插入以及第22内含子的大片段倒位。 乙型血友病（血友病B） 起因于凝血因子IX的缺乏 其分子机制是分布于整个基因各处的多种形式的突变。 诊断方法：PCR/ASO直接检测法（点突变） PCR/RFLP连锁