实验一普通光学显微镜的使用 (2).ppt

实验一普通光学显微镜的使用 第一页 一、实验目的　 1、掌握普通光学显微镜的构造及原理 2、学习并掌握正确的使用方法 3、通过永久装片及新鲜切片观察，掌握一些细胞结构或细胞活动的特点 第二页 二、实验内容 （一）显微镜的使用 （二）永久标本片的观察 （三）制作新鲜标本片 （四）作业 第三页 （一）显微镜的使用 第四页 显微镜是观察微小物体的精密仪器 第五页 1、光学显微镜的组成 光学、照明、机械 2、显微镜的性能指标 3、显微镜的使用步骤 第六页 显微镜的组成 第七页 2、显微镜的性能指标 （1）分辨力 （2）放大率 第八页 显微镜分辨能力的高低决定于光学系统的各种条件。被观察的物体必须放大率高，而且清晰，物体放大后，能否呈现清晰的细微结构，首先取决于物镜的性能，其次为目镜和聚光镜的性能。 第九页 （1）分辨力 R 显微镜能分辨两物点间的最小距离。 R=0.61λ/NA 第十页 数值孔径 NA 也叫做镜口率（或开口率），在物镜和聚光器上都标有它们的数值孔径，数值孔径是物镜和聚光器的主要参数，也是判断它们性能的最重要指标。 第十一页 数值孔径可用下式表示：NA=n·sinθ 式中： n—物镜与标本之间的介质折射率 θ—物镜的镜口角的1/2，即半孔径角。 镜口角是指从物镜光轴上的物点发出的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度，见图。 第十二页 镜口角总是小于180°。因为空气的折射率为1，所以干燥物镜的数值孔径总是小于1，一般为0.05—0.95；油浸物镜如用香柏油（折射率为1.515）浸没，则数值孔径最大可接近1.5。虽然理论上数值孔径的极限等于所用浸没介质的折射率，但实际上从透镜的制造技术看，是不可能达到这一极限的。通常在实用范围内，高级油浸物镜的最大数值孔径是1.4。 几种物质的介质的折射率如下： 空气为1.0，水为1.33，玻璃为1.5，甘油为1.47，香柏油为1.52。 第十三页 可见光的波长为0.4—0.7微米，平均波长为0.55微米。若用数值孔为0.65的物镜，则R=0.61×0.55微米/0.65=0.52微米。这表示被检物体在0.52微米以上时可被观察到，若小于0.52微米就不能视见。如果使用数值孔径为1.25的物镜，则R=0.27微米。凡被检物体长度大于这个数值，均能视见。 紫外线作光源的显微镜和电子显微镜就是利用短光波来提高分辨力以检视较小的物体的。 物镜分辨力的高低与造象是否清楚有密切的关系。目镜没有这种性能。目镜只放大物镜所造的象。 第十四页 可通过： ①__________；　　　 ②_______________； ③________________来提高分辨力。 减低波长　 增大折射率 加大镜口角 R值愈_______，分辨力愈高，物象愈清楚。 小 练 习 第十五页 （2）放大率 显微镜的放大率（V）等于物镜放大率（V1）和目镜放大率（V2）的乘积，即： V=V1×V2 第十六页 安放 对光 调焦 观察 放片 3、显微镜的使用步骤 对光：以视野明亮均匀为宜。 调焦：先在低倍镜下，以粗准焦螺旋调，再以细准焦螺旋调。看清楚物象后再 转至高倍镜下，调细准焦螺旋。注意：高倍镜不要使用粗准焦螺旋调焦。 第十七页 （二）永久标本片的观察 胞间连丝 有丝分裂 血细胞 肝细胞 人染色体ＮＯＲ 草履虫 人口粘膜上皮细胞 植物根尖纵切 第十八页 １、胞间连丝 　　贯穿两个相邻的植物细胞的细胞壁，并连接两个细胞的原生质细丝。胞间连丝中有连丝微管(desmotubule)通过,它是由两个细胞的光面内质网衍生而来。胞间连丝不仅使相邻细胞的细胞质膜、细胞质、内质网交融在一起, 而且也是植物细胞间物质运输和传递刺激的重要渠道。 第十九页 胞间连丝切片 (柿胚乳) 第二十页 ２、有丝分裂 植物细胞有丝分裂 洋葱根尖（16条染色体） 动物细胞有丝分裂 马蛔虫受精卵（4条染色体） 第二十一页 洋葱根尖细胞有丝分裂图 1 2 4 3 第二十二页 第二十三页 马蛔虫子宫切片400×铁苏木精染色 卵壳 围卵腔 受精卵 第二十四页 马蛔虫受精卵有丝分裂图 4 3 1 2 第二十五页 ３、血细胞 第二十六页 血细胞 中性粒细胞 第二十七页 ４、肝细胞切片 肝细胞切片——线粒体 第二十八页 肝板和肝血窦（示肝细胞、肝血窦、巨噬细胞） 第二十九页 肝细胞 第三十页