一种CAR-T活体示踪方法.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (10 )申请公布号 CN 110917365 A( 43 )申请公布日 (10 )申请公布号 CN 110917365 A ( 43 )申请公布日 2020.03.27 ( 21 )申请号 201911324560 .1 ( 22)申请日 2019 .12 .20 (71 )申请人 中国医学科学院北京协和医院 地址 100010 北京市东城区王府井帅府园1 号 (72)发明人 霍力 方鹏 (74 )专利代理机构 南京灿烂知识产权代理有限 公司 32356 代理人 朱妃 ( 51 )Int .Cl . A61K 51/04( 2006 .01 ) C12N 5/0783( 2010 .01 ) A61K 101/02( 2006 .01 ) 权利要求书2页 说明书9页 附图1页 权利要求书2页 说明书9页 附图1页 ( 54 )发明名称 一种CAR-T活体示踪方法 ( 57 )摘要 本发明涉及活体示踪技术领域，具体涉及一种CAR-T活体示踪方法，旨在解决现有技术中具有放射性的核素随着CAR-T细胞进入活体( 动物或者人体)体内，会对CAR-T细胞和活体造成损伤的问题，其技术要点以下步骤：S1、将预着靶分子 CN 110917365 AA与CAR-T细胞表面的氨基结合，得到具有A基团的预着靶的CAR-T细胞；其中，R2-NH2为CAR-T细胞，-NH2为CAR-T细胞表面的氨基基团；S2、将18F与寻靶分子B结合，得到具有18F的R1-N3；S3、将S1得到的预着靶的CAR-T细胞注射至活体中，在需要的显像的时间点，将R1-N3注射至体内，并与预着靶的CAR-T结合；S4、通过PET/CT扫描，即可观察到CAR-T细胞的在活体内的分布情况。本发明增加了实验人员操作的安全性，也避免了放射性对CAR-T细胞和活体可能造成的损伤。 CN 110917365 A 2 PAGE 10 2 PAGE 10 CN 110917365 A权 利 要 求 书 1/2 页 CN 110917365 A 1 .一种CAR-T活体示踪方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、将预着靶分子A与CAR-T细胞表面的氨基结合，得到具有A基团的预着靶的CAR-T细 胞； 其中，R2-NH2为CAR-T细胞，-NH2为CAR-T细胞表面的氨基基团； S2、将18F与寻靶分子B结合，得到具有18F的R1-N3； S3、将S1得到的预着靶的CAR-T细胞注射至活体中，在需要的显像的时间点，将R1-N3注射至体内，并与预着靶的CAR-T结合； S4、通过PET/CT扫描，即可观察到CAR-T细胞的在活体内的分布情况。 2 .根据权利要求1所述的一种CAR-T活体示踪方法，其特征在于，在步骤S3中，将R1-N3经静脉注射至体内，并通过内循环进入身体各处。 3 .根据权利要求1所述的一种CAR-T活体示踪方法，其特征在于，在步骤S3中，未与CAR- CN 110917365 A CN 110917365 A T细胞结合的R1-N3被排出体外。 权 利 要 求 书 2/2 页 4 .根据权利要求1所述的一种CAR-T活体示踪方法，其特征在于，所述预着靶分子A与CAR-T细胞表面的氨基结合的方法包括以下步骤：T细胞经体外分选、激活后进行慢病毒载体转导后获得CAR-T细胞，将获得的CAR-T细胞培养扩增7-10天，在培养扩增的第二天开始， 在培养液中添加预寻靶分子A，再将含有预寻靶分子A的培养液补加至细胞培养瓶中，周期性补加，直至细胞扩增完成。 5 .根据权利要求4所述的一种CAR-T活体示踪方法，其特征在于，预寻靶分子A的添加量为每1*10E+6个细胞添加1-10微克。 6 .根据权利要求5所述的一种CAR-T活体示踪方法，其特征在于，含有预寻靶分子A的培养液的补加周期为每2天一次。 7 .根据权利要求4所述的一种CAR-T活体示踪方法，其特征在于，所述细胞培养基为淋巴细胞无血培养基。 8 .根据权利要求4所述的一种CAR-T活体示踪方法，其特征在于，CAR-T细胞的培养环境为恒温37℃、二氧化碳浓度5％、相对饱和湿度95％、细胞培养基pH为7 .2-7 .4。 说明书CN 110917365 A1/9 页 说 明 书 CN 110917365 A 1/9 页 一种CAR-T活体示踪方法 技术领域 [0001] 本发明涉及活体示踪技术领域，具体涉及一种CAR-T活体示踪方法。 背景技术 [0002] 近年来血液系统常见恶性肿瘤如白血病、骨髓瘤、淋巴瘤等虽经化疗及骨髓移植技术的应用取得了巨大进步，但仍有较高的治疗失败率，耐药及复发的问题仍然难以克服。因此另辟蹊径、探寻更加安全有效的治疗手段是当