讲义生化课件.pptx

第一节 DNA的生物合成;一. DNA的复制;(一) 复制的反应;(二) 复制的方式;半保留复制;如何证明半保留复制;(二) 复制的方式;(三) 复制反应注意点;DNA聚合酶;More than 90 % of the DNA polymerase activity observed in E. coli extracts can be accounted for by DNA polymerase I ;(四)参与复制的酶和蛋白质;(四)参与复制的酶和蛋白质;DNA聚合酶;(四)参与复制的酶和蛋白质;3→5核酸外切; Every cell contains several different nucleases (核酸酶), belonging to two broad classes: exonucleases (核酸外切酶)and endonucleases (核酸内切酶). Exonucleases degrade nucleic acids from one end of the molecule. 核酸外切Exonucleases degrade nucleic acids from one end of the molecule. Many operate in only the 5 → 3 or the 3→5 direction, removing nucleotides only from the 5 or the 3 end, respectively, of one strand of a doublestranded nucleic acid or of a single-stranded DNA. ; Endonucleases can begin to degrade at specific internal sites in a nucleic acid strand or molecule, reducing it to smaller and smaller fragments. A few exonucleases and endonucleases degrade only single-stranded DNA. There are a few important classes of endonucleases that cleave only at specific nucleotide sequences.;5→3核酸外切;(四)参与复制的酶和蛋白质;(四)参与复制的酶和蛋白质;(四)参与复制的酶和蛋白质; 3. DNA连结酶 (DNA ligase);(四)参与复制的酶和蛋白质; 4. 使DNA双螺旋解开的酶和蛋白质;单链结合蛋白(SSBP)： 与解链后的DNA单链结合，阻止其再次形成双螺旋。大肠杆菌SSB为177 aa多肽，以四聚体形式存在，与32个bp DNA区相结合，结合后的DNA 分子僵硬，不易?弯曲，有利于单链DNA分子的稳定，避免核酸酶进攻；同时降低了Tm值，进一步促进DNA的解链。;旋转酶(gyrase,untwisting protein)： 催化DNA的拓扑连环数发生变化。 可分为拓扑异构酶Ⅰ和拓扑异构酶Ⅱ。 Ⅰ型酶可减少负超螺旋；Ⅱ型酶可引入负超螺旋（此时需要ATP提供能量）。具有内切酶和连接酶活力，参与DNA复制前双螺旋的松弛及复制后超螺旋的再恢复。?;dn??蛋白(mobile promoter)： 功能：识别DNA的合成的起始位置，与引物酶及其它一些蛋白组成复合体启动RNA引物链的合成。;（五）复制的过程; 复制过程的调控主要取决于复制启动的频率，而DNA延长的速度大体上是恒定的。由于真核生物在多位点上启动复制，所以尽管其DNA比原核生物DNA大得多，但复制的总速度反而比原核生物快。 ; 2. 复制眼的形成;复制眼的结构：?;; 2. 复制眼的形成-双螺旋解开的过程;（五）复制的过程;3.复制叉的推进; 另一条链延伸的方向与复制叉前进的方向相反，它显然不能被连续合成，需要复制叉推进了一定的长度，有了一段DNA单链后，才能以此为模板合成一个片段。因此这条新链的合成是不连续的，而且总晚于先导链，所以称为随后链。; 这种前导链连续合成，随后链断续合成的方式，称为半不连续复制。 随后链中合成的多个DNA片段，称为冈崎片段。冈崎片段的长度原核细胞中约1000~2000个核苷酸，真核细胞中约100~200个核苷酸。?; 引物酶在复制原点附近合成一段RNA引物； DNA聚合酶Ⅲ (原核细胞)在引物的3末端逐个添加脱氧核苷酸。 随着复制叉的推进，亲代DNA双螺旋不断被解开，先导链也不