拟南芥种植到培养基中的方法.docVIP

拟南芥种植到培养基中的方法 材料： 1/2MS培养基、植物组织培养专用琼脂、 1ml 吸头（灭菌）、 0.1%琼脂糖、水（灭菌）、 75%酒精 种植过程在超净工作台内进行，具体方法为： 1、种植前先将实验过程中用到的物品放到超净工作台，紫外线灭菌 15 分钟左右，提供一个相对无菌的环境。注：种子不能放在紫外灯下照射，以免引起损伤和变异。 2、用 75%酒精棉球将暴露于实验台内的手及其他部分擦拭一遍，起消毒作用，种植过程中最好不要在上风向放东西，手也最好不要在上风向经过。 3、在放有种子的离心管中加入 75%的酒精，消毒 5 分钟左右，时间不宜过长以免影响种子的活性。酒精的量大约为离心管体积的 2/3 ，上下颠倒离心管使种子与酒精充分接触。种子不宜过多（超过 50ul ），否则消毒效果不好。 4、消毒完后，将离心管中的酒精吸出，用灭菌的 ddH2O漂洗 3-5 遍，注意有一些种子会漂浮在水中。在洗的过程中用移液器慢慢吹打，注意更换吸头，避免交叉污染。 5、种子漂洗完后将适量 0.1%琼脂糖加入离心管中。之所以用琼脂糖而不是水是因为琼脂糖有粘性，种子会悬浮在其中，而在水中种子一般都沉在底部不便于种植。将种子均匀滴到 1/2MS培养基中，每个平皿大约种植 30 粒左右，在培养皿的盖和底部最好都要写上种植的拟南芥的名称以及日期，最后用胶条将培养皿封口。 6、将培养皿放到 4℃冰箱中（主要是让种子均匀发芽）， 2-3 天后便可拿到培养间中。