动物肝脏中dna的提取及检测实验报告.docxVIP

。 动物肝脏中 DNA的提取及检测 一、前言 脱氧核糖核酸 脱氧核糖核酸（DNA，为英文 Deoxyribonucleic acid 的缩写）， 又称去氧核糖核酸， 是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分， 同时也是组成基因的材料。 有时也被称为 “遗传微粒 ”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己 DNA的一部分复制传递到子代中， 从而完成性状的传播。 DNA是高分子聚合物， DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。 DNA对紫外线（ 260nm）有吸收作用，利用这 一特性，可以对 DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时， 吸光度又会恢复到原来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起 DNA分子变性，即 DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开 —也称为 DNA 的解螺旋。 在细胞内， DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。对于人类而言，正常的体细中含有 46 条染色体。染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制， 细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、 S 期-DNA合成期、 G2-DNA合成后期。对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。染 精选资料，欢迎下载 。 色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将 DNA进行组织并压缩，以帮助 DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。 脱氧核糖核酸的结构 DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三 级结构和四级结构四个水平。 DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤 脱氧核苷酸（ dAMP脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（ dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸 （dGMP脱氧鸟苷）。而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成 其长链骨架，排列在外侧， 四种碱基排列在内侧。每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着 DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码， 指导蛋白质的合成。 读取密码的过程称为转录，是以 DNA双链中的一条单链为模板转录出一段称为 mRNA（信使 RNA）的核酸分子。 DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用 3’， 5 ’- 磷酸 二酯键相连构成的长链。大多数 DNA含有两条这样的长链，也有的 DNA为单链，如大肠杆菌噬菌体 φX174、G4、M13等。DNA有环形 DNA 和链状 DNA之分。在某些类型的 DNA中，5- 甲基胞嘧啶可在一定限度 内取代胞嘧啶，其中小麦胚 DNA的 5- 甲基胞嘧啶特别丰富。在某些 噬菌体中， 5- 羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。 40 年代后期，查加夫 （E.Chargaff ）发现不同物种 DNA的碱基组成不同， 但其中的腺嘌呤 精选资料，欢迎下载 。 数等于其胸腺嘧啶数（ A=T），鸟嘌呤数等于胞嘧啶数（ G=C），因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和，一般用几个层次描绘 DNA的结构。 浓盐法从动物组织中提取 DNA 核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（ DNP/RNP）的形式存在， 其中 DNP能溶于水及高浓度盐溶液，但在 0.14 M 的盐溶液中溶解度 很低，而 RNP则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的 NaCl 溶液 将其从样品中分别抽提出来。 将抽提得到的 DNP用 SDS处理可将其分 离 DNA和蛋白质，用氯仿 - 异戊醇将蛋白质沉淀除去可得 DNA上清，加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。 肝脏细胞 肝脏是由肝细胞组成，肝细胞极小，肉眼看不到，必须通过显微镜才能看到。人肝约有 25 亿个肝细胞， 5000 个肝细胞组成一个肝小叶，因此人肝的肝小叶总数约有 50 万个。肝细胞为多角形，直径约为 20-30/ 加( 微米 ) ，有 6-8 个面，不同的生理条件下大小有差异，如饥饿时肝细胞体积变大。 每个肝细胞表面可分为窦状隙面、 肝细胞 面和胆小管面三种。肝细胞里面含有许许多多复杂的细微结构 : 如肝细胞核、肝细胞质、线粒体、内质网、溶酶体、高尔基氏体、微粒体及饮液泡等组成。 二、实验目的 1. 掌握浓盐法从动物组织中提取 DNA的原理与技术 精选资料，欢迎下载 。 三、实验原理 核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（ DNP/RNP）的形式存在， 其中 DNP能溶于水及高浓度盐溶液，但在 0.14 M 的盐溶液中溶解度 很低，而 RNP则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的 NaCl 溶液 将其从样品中分别抽提出来。 将抽提得到的 DNP用 SDS处理可将其分离 DNA和蛋白质，用氯仿 异戊醇将蛋白质沉淀除去可得 DNA上清