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生物化学实验2021.9modify 农信１３０１ 黄海 实验一 氨基酸、蛋白质的主要化学性质 一、目的 用实验方法验证氨基酸、蛋白质的主要化学性质，增强感性认识。 二、原理 α―氨基酸和蛋白质均含有α―氨基酰基R―CH―C―的结构，故都能与水合 | || NH2 O 茚三酮作用生成兰紫色物质。 OC OH O2 CC OHO水合茚三酮OC CHOHC OO+R CH COOHpH5 NH2100℃C CHOH+NH3C OR CHO CO+2+ OHO C+NH3+ CHO C O O CC N C C CC O O-+ONH4 ONH3 CC N C C CC O O（蓝紫色）+3H2OO O CC N C C CC O O 脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应不释放氨而直接生成黄色化合物。 蛋白质分子中含有肽键，与双缩脲结构相似，故在碱性环境中能与硫酸铜结合成紫红色的络合物，此反应称为双缩脲反应。 蛋白质分子中若存在含有苯环的氨基酸，如酪氨酸、色氨酸等，当其与浓硝酸 1 农信１３０１ 黄海 共热时，则变成黄色，这就是黄蛋白反应，若再继续加碱则颜色转变成橘黄色。 若蛋白质分子中具有含硫氨基酸如半胱氨酸、蛋氨酸等，则与碱及醋酸铅共热时，分解而产生硫离子，后者遇铅盐即生成黑色硫化铅沉淀。 蛋白质胶体是亲水胶体，若除去其质点上的水膜和电荷，蛋白质粒子则凝聚析出，这就是蛋白质的沉淀作用，使蛋白质胶体沉淀的方法有多种，常用的有下列几种： 1、 盐析法： 加中性盐或硫酸铵等电解质试剂于蛋白质溶液中，这些电解质离子的水化能力比蛋白质强，可以夺去蛋白质粒子外围的水膜，并且蛋白质粒子外围的双电层又受到了压缩，也就是使其所带的电荷削弱，蛋白质胶体粒子由于失去两种使自己稳定的因素而沉淀。 2、 有机溶剂的沉淀作用： 水溶性的有机溶剂如乙醇、丙酮等，它们与水的亲和力大于蛋白质，因此能破坏蛋白质粒子的水膜，而使其沉淀析出。 3、生物碱试剂的沉淀反应： 生物碱沉淀剂如三氯醋酸、若味酸、鞣酸等都能与蛋白质阳离子结成不溶性的盐而沉淀析出。 4、重金属离子的沉淀作用： 某些重金属离子，如Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ag+等，能与蛋白质阴离子结合成不溶性盐类而沉淀析出。 三、实验试剂与器材 （一）试剂 1%甘氨酸、5%蛋白质溶液、0.25%茚三酮水溶液、10%NaOH、1%硫酸铜、浓硝酸、2%醋酸铅、饱和硫酸铵溶液、95%乙醇、10%鞣酸溶液、饱和苦味酸。 （二）器材 电炉、烧杯、试管。 四、操作步骤 1、茚三酮反应 在两支试管中，分别加入甘氨酸1ml和5%蛋白质溶液1ml，然后各加入0.25%茚三酮水溶液10滴，将试管放入沸水中加热几分钟，观察现象。 2、双缩脲反应 向存有1ml 5%蛋白质溶液的试管中，加入10% NaOH 10滴。充分摇匀，逐滴加入1%CuSO4数滴，观察试管中的颜色变化。 注意：硫酸铜不能多加，否则将产生蓝色Cu(OH)2，防碍此颜色反应的观察。 3、黄蛋白反应 向一支盛有0.5ml 5%蛋白质溶液的试管中加入浓硝酸4滴，并加热，观察有何 2 农信１３０１ 黄海 现象出现？然后再加入10% NaOH 1ml，观察有何变化？ 4、蛋白质中硫的鉴定 取头发几根或指甲少许，并加10%NaOH 2ml 于试管内，煮沸2分钟，冷却后加入3～4滴2%Pb(Ac)2溶液，观察其现象，说明头发或指甲中有什么样的结构存在。