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细菌转化,单克隆挑选及摇菌
1.接种50~100ul菌液于5 ml LB试管中,37℃ 250转/分 震荡约3小时,至OD600≈0.2-0.6时停止振荡(透过管能看到手指要挑选细菌活力强时)
2、取1.5ml离心管与菌液放冰浴冷却15min
3.将细菌转移至1.5mL的离心管中,4℃,4000转/分离心15min(防止菌体破裂),弃上清液
4.以1ml 0.1M(0.2倍菌液体积)预冷的CaCl2重悬细菌沉淀,冰浴30min,4℃,4000转/分离心15min,弃上清液
5.用250μl(0.05倍菌液体积)预冷的CaCl2重悬细菌沉淀
6.1ng质粒DNA加
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