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Primers/Probes Design Guideline
TaqMan Probe Primer
Probe Primer 離 , PCR 50-150 bp
G/C % 30-80 %
列 4 G
Tm : 68-70 (Quantification assay) Tm : 58-60
65-67 (Allelic Discrimination assay)
Probe 度 : Primer 度 :
13~25 bases (TaqMan MGB probe) 20 bases (Optimal)
13~30 bases (TaqMan probe)
連 6 A 列 3’ 列裡不 2 C+G
5’ 列不 G
( FAM-dye 5’ 列 不 G)
b
C G strand probe
3’ 4 列裡 3 G
a
(GGG-MGB-3’ or GGAG-MGB-3 ’)
a
probe 2 CC di-nucleotides
a: TaqMan MGB probe
b: 參數
Primer Express Operation Guide
Primers Probes for Quantification
Automatically Design
Primer Express 3.0
File→ New→ “TaqMan MGB Quantification TaqMan Quantification ”→ OK
Tools → “AddDNA File ” 列 ”Add” 列
”Sequence” Tab Copy Paste
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