动物肝脏中dna的提取及检测实验报告.docVIP

动物肝脏中DNA勺提取及检测 一、前言 脱氧核糖核酸 脱氧核糖核酸（DNA ,为英文Deoxyribo nucleic acid 的缩写）， 又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分， 同时也 是组成基因的材料。有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程 中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成 性状的传播。 DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘 度，可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线（260nm ）有吸收作用， 利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度 升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原 来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引 起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解 开一也称为DNA的解螺旋。 在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统 称为染色体组。对于人类而言，正常的体细中含有 46条染色体。染 色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划 分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后 期。对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细 胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟 核内。染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将 DNA进行组织 并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的 转录。 脱氧核糖核酸的结构 DNA的结构：DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、 三级结构和四级结构四个水平。 DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌 呤脱氧核苷酸（dAMP脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP脱 氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核 苷酸（dGMP脱氧鸟苷）。而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由 酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。每 个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着 DNA长链 所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。读取密码 的过程称为转录，是以DNA双链中的一条单链为模板转录出一段称 为mRNA （信使RNA ）的核酸分子。 DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用 3 ， 5 -磷 酸二酯键相连构成的长链。大多数 DNA含有两条这样的长链，也有 的DNA为单链，如大肠杆菌噬菌体 ? X174、G4、M13等。DNA 有环形DNA和链状DNA之分。在某些类型的 DNA中，5-甲基胞 嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶，其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶 特别丰富。在某些噬菌体中，5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。40年 代后期，查加夫（E.Chargaff ）发现不同物种DNA的碱基组成不同， 但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数 （A=T ），鸟嘌呤数等于胞嘧啶 数（G=C），因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和，一般用几个层次描绘 DNA的结构。 浓盐法从动物组织中提取DNA 核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）的形式存在， 其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液，但在 0.14 M的盐溶液中溶解 度很低，而RNP则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的 NaCI 溶液将其从样品中分别抽提出来。将抽提得到的DNP用SDS处理可 将其分离DNA和蛋白质，用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得 DNA上清，加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。 肝脏细胞 肝脏是由肝细胞组成，肝细胞极小，肉眼看不到，必须通过显微 镜才能看到。人肝约有25亿个肝细胞，5000个肝细胞组成一个肝 小叶，因此人肝的肝小叶总数约有 50万个。肝细胞为多角形，直径 约为20-30/加（微米），有6-8个面，不同的生理条件下大小有差异， 如饥饿时肝细胞体积变大。每个肝细胞表面可分为窦状隙面、肝细胞 面和胆小管面三种。肝细胞里面含有许许多多复杂的细微结构 ：如肝 细胞核、肝细胞质、线粒体、内质网、溶酶体、高尔基氏体、微粒体 及饮液泡等组成。 二、实验目的 掌握浓盐法从动物组织中提取 DNA 的原理与技术 三、实验原理 核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白 ( DNP/RNP )的形式存在， 其中 DNP 能溶于水及高浓度盐溶液，但在 0.14 M 的盐溶液中溶解 度很低，而 RNP 则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的 NaCl 溶液将其从样品中分别抽提出来。 将抽提得到的 DNP 用 SDS 处理可将其分离 DNA 和蛋白质，用 氯仿 -异戊醇将蛋白质沉淀除去可得 DNA 上清，加入冷乙醇即可将 其呈纤维状析出。 四、实验器材和材料试剂 实验器材： 匀浆器 量筒 离心机 离心管 试管 吸管 恒温水浴锅 实验材料： 猪肝 实验试剂：