基因工程原理第二章DNA重组.pptx

基因工程原理;第二章 DNA重组;第一部分 DNA的组成和结构;1.1 DNA的组成;1.2 DNA的空间结构;1.3 DNA复制;复制起始位点（replication origin site）; ; ;2021/5/28;9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。5月-215月-21Friday, May 28, 2021 10、低头要有勇气，抬头要有低气。03:44:3903:44:3903:445/28/2021 3:44:39 AM 11、人总是珍惜为得到。5月-2103:44:3903:44May-2128-May-21 12、人乱于心，不宽余请。03:44:3903:44:3903:44Friday, May 28, 2021 13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。5月-215月-2103:44:3903:44:39May 28, 2021 14、抱最大的希望，作最大的努力。28 五月 20213:44:39 上午03:44:395月-21 15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。五月 213:44 上午5月-2103:44May 28, 2021 16、业余生活要有意义，不要越轨。2021/5/28 3:44:3903:44:3928 May 2021 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。3:44:39 上午3:44 上午03:44:395月-21;9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。5月-215月-21Friday, May 28, 2021 10、低头要有勇气，抬头要有低气。03:44:3903:44:3903:445/28/2021 3:44:39 AM 11、人总是珍惜为得到。5月-2103:44:3903:44May-2128-May-21 12、人乱于心，不宽余请。03:44:3903:44:3903:44Friday, May 28, 2021 13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。5月-215月-2103:44:3903:44:39May 28, 2021 14、抱最大的希望，作最大的努力。28 五月 20213:44:39 上午03:44:395月-21 15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。五月 213:44 上午5月-2103:44May 28, 2021 16、业余生活要有意义，不要越轨。2021/5/28 3:44:3903:44:3928 May 2021 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。3:44:39 上午3:44 上午03:44:395月-21;复制子;2021/5/28;复制子的数量;1.4 DNA转录启动子和转录区的结构;Pribnow box;Shine-Dalgarno sequence; SD sequence ;Pribnow box;1.5 DNA转录终止子（transcription terminator）;富含GC;回文序列：双链DNA中含有的两个结构相同、方向相反的序列称为反向重复序列，当该序列的双链被打开后，可形成局部“十”字形结构。这段序列被称为回文序列。;2021/5/28;1.6天然DNA的来源和用途;（1）大肠杆菌源质粒DNA的提取 （2）λ噬菌体DNA的提取 （3）氯化铯法制备植物基因组DNA;（1）大肠杆菌源质粒DNA的提取;（2）λ噬菌体DNA的提取;1.8 DNA的纯化;2021/5/28;第???次课结束！;第二部分 基因工程工具酶;2021/5/28;基因工程工具酶;一、序列特异的DNA限制性内切核酸酶 (Restriction endonuclease, RE）;限制性内切酶的命名和书写：;RE的功能: 防御外源DNA感染,利于遗传的稳定性 RE抑制了细菌种属间的交叉繁殖,但甲基化酶的某些误差,又使得不同菌株间DNA的重组成为可能,利于生物的进化.;1968年,从大肠杆菌中分离到了I型RE,1970年,从大肠杆菌中分离到了II型RE;2021/5/28;;（1）在DNA分子双链的特异性识别序列部位,切割DNA分子,形成链的断裂. 识别序列:又叫靶子序列,是由4-8个核苷酸组成的特定核苷酸序列. ;（2）识别序列在DNA分子上出现的频率;同裂酶(isoschizomer)---来源不同,但识别同样的核苷酸靶子序列. 例如:Hpa II和Msp I的识别序列都为;;DNA片段末端种类：;;反应总体积：20微升 酶的用量 缓冲液的组成与酶的种类有关 反应时间1-3小时。;13 mL蒸馏水 2 mL 10x缓冲液 4 mL 底物DNA 1 mL RE;底物DNA：;标准缓冲液的组成：;2021/5/28;反应温度：大