电子显微镜免疫组织化学技术.pptVIP

第七章 免疫电镜;;一 电镜免疫组织化学技术概述 二 几种常用的透射电镜方法要点;一 电镜免疫组织化学技术概述;（一）组织固定与取材; 影响固定的因素有： ① 固定剂的种类； ② 固定剂的浓度，浓度过大，对抗原的活性有影响，浓度过小，固定效果差； ③ 固定剂的pH； ④ 固定剂的温度,一般采用2℃～4℃冷固定；这样能降低细胞自溶作用和水分抽提； ⑤ 固定时间与温度有关，温度高，固定快，也与缓冲系的离子强度有关，离子强度大，渗透压大，穿透力强，固定要快。不同的固定剂，或同一固定剂的不同浓度所需的固定时间也不一致； ⑥ 与被固定的细胞类型有关。 ; 选用固定剂不宜过强。常采用灌注固定法。 多聚甲醛—戊二醛混合液 过碘酸—赖氨酸一多聚甲醛液(PLP液)： 对含糖类丰富的组织固定效果特佳。 （使用前必须用已知效价的抗原做一系列预实验。如固定剂的种类浓度、温度、pH及固定时间等。然后做出预处理的效价，作为失活参考以再选择最适条件。） ;（二）免疫染色;1 包埋前染色; 包埋前染色的组织，以中层较为理想。 表层因受机械修整，结构保存不好，深层因抗体不能透入，免疫反应弱或无。 半薄切片可在相差显微镜下不染色观察（PAP），免疫反应部位呈黑点状； HE或甲苯胺蓝染色的半薄切片上，免疫反应部位呈棕黄色。 取相连续的超薄切片 为避免电