诊断血液学一般检查.pptxVIP

实验一 血液学一般检查 ;1.血红蛋白测定--- 氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法 ;; [试剂] 血红蛋白转化液（文齐氏液）： 氰化钾（KCN） 0.05g 高铁氰化钾[K3Fe(CN)6] 0.20g 无水磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.14g Triton X—100 1.0ml 蒸馏水 加至1000ml ;[操作];3.于722分光光度计上以转化液为空白进行比色测定，波长540nm,光径1.0cm。;将HiCN标准液倍比稀释（如50g/L、100g/L、150g/L、200g/L）后,在所用的分光光度计上540nm处，光径1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线,或求出换算常数K(K=ΣHb/ΣA)。则通过待测标本吸光度值查标准曲线或用K值计算血红蛋白浓度（Hb=K×A）。 ;[参考值] 成年男性： （120～160）g/L 成年女性： （110～150）g/L 新生儿： （170～200）g/L [注意事项] 1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、使用中需妥善。 2.标准曲线或K值，应定期检查、校准。;2.白细胞计数;;[试剂] 白细胞稀释液：冰醋酸 2ml 1%龙胆紫 1ml或结晶紫数滴 蒸馏水加至 100ml [标本来源] EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血 ;1.加稀释液：取白细胞稀释液0.38ml于一干净小试管中。 2.加血：用血红蛋白吸管取全血（指血或EDTA-K2抗凝血）20μl，轻拭管尖外余血，准确调节血液液面至20μl处，将血红蛋白吸管插入白细胞稀释液中（即小试管底部），迅速将血液放出，并用上清液吸吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液。 3.溶血：轻轻混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破坏。 4.冲池：用微量吸管或玻棒取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池（一次充好，液体不可外溢，不可有气泡，否则擦净重充），室温水平静置2～3分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。 5.计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台上，低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数。（压线细胞计数原则：数上不数下，数左不数右） ;;计数池构造;低倍镜下的计数池大方格结构;低倍镜下的白细胞形态（10X10）;白细胞计数操作步骤;[报告方式] 白细胞数（WBC）：__×109/L [参考值] 成人： （4～10）×109/L 新生儿：（15～20）×109/L ;1.采血及计数室充液注意事项: 毛细血管采血部位的皮肤必须正常，凡局部有水肿、发炎、紫绀或冻疮等均不可穿刺采血。 穿刺必须足够深，使血液自行流出或轻施压力即可流出。 EDTA-K2抗凝全血使用前需混匀。 计数盘和盖玻片在使用前需用稠布或纱布擦拭干净。 血红蛋白吸管内腔一定要干燥，否则会影响吸血量及导致溶血。 毛细血管采血动作必须迅速否则常易凝固，若作血红蛋白和红细胞计数两项时，应先取红细胞计数标本，后作血红蛋白测定。 手指血红细胞与静脉采血有差异且影响因素多，条件允许时应尽量静脉采血。 ;2．一定要在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否则因RBC残存而干扰计数使结果偏高。 3．白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，某些病理情况下外周血出现大量有核红细胞，可使白细胞计数结果偏高，应进行校正。 校正公式：WBC=A×[100/(100+B)] 其中A:校正前WBC数；B:分类计数100个WBC时遇到的有核RBC数。;实验报告要求（报告上写明班级、学号）