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β-葡糖苷酶(纤二糖酶)测定方法 β-葡糖苷酶(纤二糖酶)测定方法 PAGE β-葡糖苷酶(纤二糖酶)测定方法 试验二β-葡萄糖苷酶(BG; EC)活性测定 新鲜土样 比色法的原理：以对硝基苯-β-D-吡喃葡糖苷为基质，水解产生对硝基酚，比色测定（硝基酚比色法）。 1.配置溶液： 改进的通用缓冲溶液（MUB）贮备液：三羟甲基氨基甲烷（C4H11NO3即Tris）、马来酸（C4H4O4）、14g柠檬酸（C6H8O7）和硼酸（H3BO3）溶于500ml NaOH溶液中，用去离子水稀释至1L，于4℃下贮存。 pH值的MUB缓冲溶液：在继续搅拌下，在200ml MUB贮备液中分别滴加 HcL或 NaOH至溶液pH值为，去离子水稀释定容至1L 4-Nitrophenyl-beta-D-glucopyranoside对硝基酚-β-D-吡喃葡糖苷（PNPG）溶液[C12H15NO8=]： PNPG溶于40ml MUB溶液（pH为）中，用相同pH值的缓冲液稀释至50ml，于4℃下贮存。 Cacl2溶液（）：取无水Cacl2 加入1L的容量瓶中配置 Tris缓冲液[c（C4H11NO3）=，pH值]： g三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶于800ml去离子水，用 NaOH调节pH至，去离子水稀释至1L 标准对硝基苯酚溶液：溶解?对硝基酚于400ml?双去离子水中，定容到500mL，保存于4度，用时再稀释10倍。稀释后为。 （一般需1000ppm） 2.试验过程 (1)取1g新鲜土样(2mm)于100ml三角瓶中，加甲苯, 通风橱10min后，4ml pH为的MUB溶液和1mm PNPG溶液，盖上瓶盖，充分混匀，在37℃培养1h。 (2)加1ml Cacl2溶液和4ml pH值的Tris缓冲液，摇匀，迅速用快速滤纸过滤，滤液在400nm处比色测定。做空白对照时，可在培养结束后，加Cacl2溶液和tris缓冲液之前加入1mL缓冲液（代替1mL底物）溶液。每个样品必须做一个空白和三次重复。 (3)标准曲线：吸取0，，1，2，3，4，5, 6ml于100ml容量瓶中，加去离子水稀释至5ml，然后加1ml氯化钙溶液和4ml tris溶液，充分混匀后定容50ml，过滤，400nm处比色测定 结果计算 β-葡萄糖苷酶活性（μg对-硝基酚 .）=CV/dwt 式中：C表示样品对-硝基酚的含量（μg/ml）； V表示土壤溶液体 Dwt表示烘干土壤质量 个人做法实验终止后加入5mL离子水稀释后过滤（若果用微孔板，则可以不用加离子水）