冰冻切片免疫组化修订稿.docxVIP

“?????? 冰冻切片免疫组化 WEIHUA system office room [WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8- 1冰冻切片4?8um,室温放置30分钟后，入4c丙酮固定10分钟（另：丙酮先 在-20C预冷,然后在4C固定片子15分钟,固定后在室温下干燥后再做免疫组 化），PBS洗，5分钟X3。 2用3% （另％）过氧化氢孵育5?10分钟（另：最好是用3%H2O2/甲醇溶液， 室温20分钟。此配方不易产生脱片。配制方法是在9ml甲醇中加30%H2O2 1ml,混匀后使用，每次新鲜配制），消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗， 5分钟X2。 3 570%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，勿 洗， 4滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37c孵育1?2小时或4c过夜。 5回收一抗，PBS冲洗，5分钟X3次。 6滴加适当比例稀释的生物素标记二抗（1%BSA-PBS稀释），37c孵育10?30 分钟；或滴加第二代生物素标记二抗工作液，37c或室温孵育10?30分钟。 7 PBs冲洗，5分钟X 3次。 8显色剂显色（DAB或AEC）。 10自来水充分冲洗，复染，封片。 如果你的组织曾放在多聚甲醛中固定的话，建议还是抗原修复效果比较好，如 果没在甲醛中浸泡，无需抗原修复。 如果你的片子切完后在冰箱中保存的话，做之前，从冰箱取出后先室温半小 时，然后入37c烤箱一小时，再进行免疫组化实验，掉片现象会少一点。我们 以前片子从-20C取出后，接着就做免疫组化，片子掉得很多。