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金线莲的组织培养研究 金线莲的组织培养研究 福建师范大学学报(自然科学版) JOURNALOFFUJIANTEACHERSUNIVERSITY (NATURALSCIENCE) 13(2):82～87 金线莲的组织培养研究 范子南　肖华山　范晓红 (生物工程学院) 摘　要　应用植物组织培养方法研究了金线莲(Anoectochilusroxburghii(Wall.)Lindl.)快速繁殖的途径,初步完善了工厂化生产金线莲试管苗的工艺流程.研究结果表明,时间是5月,培养基最佳pH为514～516.的植物生长物质或浓度可使培养的金线莲茎段1,0金线莲,又名金线兰、鸟人参等,属兰科植物,主要分布于亚洲的日本、中国、斯 里兰卡、印度和尼泊尔等国.其生态分布也较特殊,适应性较窄,主要生长在深山密林下或溪涧旁潮湿的草丛中或竹林下,特别是阔叶林下的荫湿地带,一般呈稀疏、零星分布,很少成片密生.金线莲是我国传统的珍贵药材,它清凉解毒、滋阴降火、消炎止痛,对无名肿痛、发烧、止泻、蛇伤等均有显著的疗效,无毒无副作用,使用安全;其株型小巧美观,叶型优美,叶脉金黄色呈网状排列,是观赏价值极高的室内观叶珍品,因此金钱莲具有广阔的开发利用前景.然而,由于金线莲对生态条件要求较严,而适应性较差,其蕴藏量甚少,加上山间蛇、鼠和鸟等飞禽走兽喜食,变得更为珍贵[1～3].金线莲珍贵的另一个原因是自然和人工繁殖均很困难,其市场价高达每kg2000多元.为了人类的医药保健事业,人们期望有朝一日能借用现代科学技术进行金线莲的快速繁殖,以降低市场价格,造福人类.但这方面的研究,国内外尚无系统的报道[4～6],1990年以来,作者考察研究了本省11县5市金线莲的生态环境及其生物学特性并采集样品进行组织培养研究,以探索快速繁殖金线莲的有效途径和方法.经过3年多的努力,取得了一些进展. 1　材料与方法 收稿日期:1996-04-21.福建省教委资助的项目 范晓红现在福建省科委农牧业研究中试基地工作. 第2期　　　　　　　　　范子南等:金线莲的组织培养研究83 实验材料分别来自日本、西双版纳、永安、永定、南平和来舟等地.112　表面消毒方法 将不同季节采集回来的金线莲用自来水冲洗干净→肥皂水振荡2min→无菌水振荡→10%Ca(ClO)2上清液浸泡10min.→011%HgCl2∶95%酒精=1∶0105试剂消毒10min→无菌水振荡、冲洗5次→切除伤口部分约1min,然后切成1～2cm长的茎段接入培养基.培养温度25±2℃,光照12h d,2200Lx.113　植物激素对金线莲生长的影响 基本培养基为改良ER(Ar),不同的激素浓度组合用L9(34)正交实验表安排,每处理6瓶,每瓶3株,所得结果进行统计分析.114　不同pH值对金线莲生长的影响 培养基为Ar+BA4mg 范围L(单位下同)+KT1018IBA14分6级实验,探索培养金线莲最适pH115　活性碳或以石,,观察它们对无根的、.11将不同苗龄的金线莲试管苗在移栽前搬至室外置于散射光下并拔除瓶塞炼苗4天,然后移至上层覆沙约2cm厚的畦中(上砂下土)栽培,畦的三边扩以环边沟,沟内经常保持一定水层,沟衬以薄膜塑料,防止沟水浸漏和浸入畦面,上盖以遮光率为65%以上的遮阴网,并保持网内相对湿度80～95%,土壤含水量1316%,光照强度在3000Lx以下. 2　结果与讨论 211　无菌培养物的建立 将分别在2、5、7和9月的不同季节从不同地区采回的野生种作为外植体,在同一表面消毒方法和培养条件下,比较不同季节的外植体褐变死亡率和存活率,见表1.结果表明,不同季节采集的外植体其褐变死亡率和存活率是不一样的.其中5月是外植体采集的最佳时间,而9月采集的外植体则因此时金线莲正处于现蕾开化时期,体内贮存养份较少,因而存活率较低. 表1　不同季节金线莲外植体的褐变死亡率和存活率比较 项目褐变死亡率(%)成活率(% 2月2114378157 5月1610084100 7月2519374107 9月6217037130 注:褐变死亡率和存活率是扣除污染率后统计. 212　植物激素对金线莲生长的影响 21211　植物激素对初级无菌苗(金线莲)生长的影响:组织培养中金线莲的分化和生长 需要较长的时间,一般要在20d以上方可用肉眼观察出变化.刚长出的小芽一般为黄白 福建师范大学学报(自然科学版)　　　　　　　1997年6月　84 色,随着培养时间的延长逐渐转为黄绿色.芽丛在节四周长出的