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流式细胞仪上机培训手册簿 流式细胞仪上机培训手册簿 PAGE 流式细胞仪上机培训手册簿 流式细胞仪上机操作培训手册 一、样本处理 以PBMC表面抗原的流式检测步骤为例 取样。取新鲜提取或冻存后复苏的PBMC； 编号。根据实验设计，标记好流式管，如每份PBMC设两管： 1号管：相应同型对照； 2号管：CD3,CD4,CD8,CD56四标管； 加样。用移液器取100ul细胞/管（约1×106个细胞/管），分别加到已经标记好的流式管底部； 洗涤。加入1ml PBS/管，涡旋1600rpm/min，离心6min； 染色。弃上清，加入100 μl PBS/管涡旋混匀细胞，并根据实验设计，向各流式管中加入相应的荧光素标记抗体，混匀，室温避光孵育30min（操作尽量保持在避光条件下进行。） 洗涤。加入1ml PBS/管，涡旋1600rpm/min，离心6min； 重悬。弃上清，加入 PBS/管，混匀，上机检测(可选择BD FACSCanto II或BD Accuri C6)。 （注：若不能及时上机，应加入4%多聚甲醛固定，并于4℃避光保存。） 8） 试验结果分析。 （注：实验过程中如果进行多色标记，需要调节荧光补偿）。 参考值： CD3+ （CD3-CD56+） 二、上机检测 BD FACSCanto II简要操作流程 启动流式细胞仪 1 打开流式细胞仪电源 2 启动计算机，打开软件登录 3