第12章基因工程与药物蛋白生产.pptxVIP

;1. Some therapeutic products for used in humans;;Genentech的骄人业绩;美国已批准上市的基因工程药物（1997.7）;;;;中国已经批准上市的基因工程药物（1998.5）;;;2. Insulin:Conversion of preproinsulin to insulin;The structure of insulin;proinsulin and production of recombinant-derived insulin by separate fermentations for A- and B- chains;Process used to make human insulin from fusion proteins synthesized in E. coli;Expression of human insulin in E. coli;3. Growth hormone: Dwarfism ;Structure of the first vector used to produce human growth hormone (hGH) in E. coli;Bacterial production of human growth hormone (hGH);Bacterial production of human growth hormone (hGH);4. HBV vaccine;Production of a subunit vaccine in yeast;5. tPA; Fab - antigen binding fragment Fc - fragment of constant region Fv - fragment of variable region Fd -VH + CH1 ScFv- single chain fragment of variable region;;抗体攻击病毒;凝集细菌;;抗体 是对其抗原有极强专一性 的 魔弹 或 巡弋飞弹;抗体生成技术;;整体水平抗体生成技术;多克隆抗体 polyclonal antibody;多克隆抗体（polyclonal antibody） 指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混合物。 如:免疫血清（含多种特异性抗体）。 实际意义： （1）预防、治疗感染性疾病， 如：破伤风抗毒素血清 ? 抗破伤风， 胎盘球蛋白? 抗病毒感染等 副作用：?超敏反应 （2）临床诊断，如：肥达氏反应 -- 伤寒、副伤寒 缺点：特异性差。;传统抗血清;;单克隆抗体 Monoclonal antibody;单克隆抗体生成;; ;;1;m; 抗体;;基因工程抗体 Genetic Engineering Antibody;;1 人一鼠嵌合抗体(Chimeric Antibodies); 构建嵌合抗体的大致过程是，将鼠源单抗的可变区基因克隆出来，连到包含有人抗体恒定区基因及表达所需的其它元件(如启动子、增强子、选择标记等)的表达载体上，在哺乳动物细胞(如骨髓瘤细胞、CHO细胞)中表达。; 克隆鼠单抗的可变区基因，可从基因组文库中分离，也可用PCR技术分离。 人抗体恒定区可根据需要选择，不同的恒定区会带给嵌合抗体不同功能。为避免人抗体的恒定区产生不需要的副作用，可通过点突变来修饰调整其效应。;2 鼠单抗可变区的人源化;; 经过CDR移植，抗体的免疫原性极低，而其抗原结合能力保持不变，结合半抗原及全抗原(如细胞表面受体、病毒等)的改形抗体都已有报道，到现在已有数百种人源化抗体。（美国正式上市的11种治疗性单抗中多数是改型抗体）。 ; 人源化抗体的构建可用全合成法或定点突变法。 全合成法是以人抗体序列为骨架，以鼠抗体的CDR置换人抗体的CDR，将整个可变区序列的两条链分解成若干片段，并使相邻的片段具有彼此互补的粘性末端。合成所有DNA片段，每组片段分别退火，然后逐组连接成完整的可变区基因，插入质粒中，进一步即可用于构建和表达改形抗体。 ; 定点突变法是将人的可变区基因克隆，根据鼠抗体的CDR 序列合成几种突变引物，用定点突变的方法将人的可变区基