新型冠状病毒及其免疫奶牛所产含特异性抗体牛奶或血清的制备方法及其应用发明专利.docxVIP

新型冠状病毒及其免疫奶牛所产含特异性抗体牛奶或血清的制备方法及其应用 技术领域 本发明属于生物技术领域，具体涉及针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2型及其特异性 抗体阳性牛奶和血清的制备及其应用。 背景技术 由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndromecoronavirus 2, SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 19,COVID-19)于2019年 底出现并呈现全球爆发，严重危害人类健康和公共卫生安全，给世界社会和经济带来巨大负 担，已引发全球范围内的高度关注。截止到2020年7月底，全球累计新冠肺炎确诊病例超 过1400万例，死亡人数超过60万。许多国内外学者推测新冠病毒或将类似于流感病毒，与 人类长期共存。而且现有的研究报道和数据表明SARS-CoV-2的致死率远高于流感，然而到 目前为止还没有专门针对抗新型冠状病毒的治疗和预防制剂或疫苗可以使用，因此亟需找到 针对SARS-CoV-2的有效预防和治疗方法。抑制病毒进入细胞是一个很有效的治疗策略。研 究报道血管紧张素转化酶2(angiotensionconvertiong enzyme2,ACE2)是SARS-CoV的功 能性受体，能够与SARS-CoV表面的S蛋白高效结合，SARS-CoV通过细胞表面受体ACE 2入侵细胞(Li Wenhui等，2003；Kuba K,2005)。因此，研究人员构建了重组ACE2蛋白， 发现其对SARS-CoV具有潜在的治疗作用(Kuba K,2005)。Daniel W等(2020)的报道发 现，SARS-CoV-2的S蛋白也能和ACE2受体结合，且亲和力远高于SARS-CoV的S蛋白。 Vanessa Monteil等(2020)研究报道，在SARS-CoV-2感染细胞之前，先与体外纯化的重组人ACE2蛋白共孵育一段时间，病毒的感染力会急剧下降，下降幅度可达1000-5000倍， 研究也发现在SARS-CoV-2感染细胞之前与鼠类的ACE2蛋白共孵育一段时间则无法抑制SARS-CoV-2的感染。但是，研究发现重组rACE2的半衰期只有几个小时，在体内很快就被 清除(Wysocki J等，2010；Haschke M等，2013)。在临床上使用新型冠状病毒肺炎康复 者的血清对危重症患者具有一定的疗效，但是用康复者血浆治疗病毒感染的方法并不能得到 普及，一方面由于治愈康复期患者身体虚弱、不适合献血，另一方面也受到血浆来源等因素的限制。 本发明首次报道了将SARS-CoV-2灭火后免疫奶牛，收集免疫后的血清和牛奶，将其作 为一种特殊的“抗体”中和SARS-CoV-2，阻止病毒入侵细胞，是一种专门针对新型冠状病毒 感染时的有效预防和治疗性生物制剂。 发明内容 本发明的目的在于提供了一种分离的新型冠状病毒，所述的新型冠状病毒毒株已于202 1年01月04日送至中国典型培养物保藏中心保藏，分类命名：SARS-CoV-2/ZY38-1，保藏 编号：CCTCC NO:V202107，地址：中国武汉武汉大学。 本发明的目的是针对严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV-2)难以预防和治疗的 问题，新型冠状病毒毒株在制备含有新型冠状病毒抗体阳性牛奶或血清中的应用，用制备的 抗原免疫奶牛产生含有抗SARS-CoV-2病毒的特异性抗体的免疫血清和免疫奶，利用所获得 的新冠病毒免疫奶纯化Igs蛋白，用于制备治疗或预防SARS-CoV-2感染的生物制剂。 为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施： 一种分离的新型冠状病毒，所述的新型冠状病毒毒株已于2021年01月04日送至中国 典型培养物保藏中心保藏，分类命名：SARS-CoV-2/ZY38-1，保藏编号：CCTCC NO:V202107，地址：中国武汉武汉大学。 新型冠状病毒毒株在制备含有新型冠状病毒特异性抗体阳性牛奶或血清中的应用，所述 的新型冠状病毒登陆号为EPI_ISL_486645；其应用过程包括将灭活的新型冠状病毒株通过 颈部或臀部肌肉注射免疫奶牛，从而获取含有新型冠状病毒抗体阳性的牛奶或血清。所述的 新型冠状病毒的保藏编号：CCTCC NO:V202107，地址：中国武汉武汉大学。 以上所述的应用中，优选的，所述的灭活的新型冠状病毒是制备成免疫制剂对奶牛进行 免疫，其是将灭活验证合格的新冠病毒液离心去除细胞碎片后，浓缩，获得高浓度的抗原； 水相制备：在浓缩抗原中加入2％～4％吐温80； 油相制备：macro152白油添加5％～6％司本85和1％～2％硬脂酸铝，灭菌； 水相和油相按3:2～4:3比例混合后即为新冠病毒免疫制剂。 本发明的保护范围还包括： 利用上述方法制备的牛奶或血清来评价新型