2019新型冠状病毒N蛋白线性表位肽和单克隆抗体及应用发明专利.docxVIP

2019新型冠状病毒N蛋白线性表位肽和单克隆抗体及应用 本申请要求申请日为2020年2月4日，申请号2020100799132，发明名称为《2019新型冠状病毒N蛋白线性表位肽和单克隆抗体及应用》的在先申请的优先权。 技术领域 本发明涉及免疫学领域及抗体制备技术，具体地说，涉及2019新型冠状病毒N蛋白线性表位肽和单克隆抗体及应用。 背景技术 冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株，人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。 目前对于新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法。但许多症状是可以处理的，因此需根据患者临床情况进行治疗。此外，对感染者的辅助护理比较有效。研制针对该病毒的特异性抗体，有助于2019-nCoV所引起肺炎的诊断和治疗。 发明内容 本发明的目的是提供2019新型冠状病毒N蛋白线性表位肽和单克隆抗体及其应用。 本发明提供的2019-nCoV N蛋白表位肽，其氨基酸序列含有以下任一所示的多肽序列： 多肽1：SDNGPQSNQRNAPRITFG； 多肽2：PSDSTGSNQNGERSGARSKQ； 多肽3：PGSSRGTSPARMAGNGGDAALA； 多肽4：PKKDKKKKADETQALPQRQKK； 多肽5：SADSTQA。 本发明提供的多肽1是位于2019-nCoV N蛋白氨基酸序列第2-19的多肽；多肽2是位于氨基酸序列第20-39的多肽；多肽3是位于氨基酸序列第199-220的多肽；多肽4是位于氨基酸序列第368-388的多肽；多肽5是位于氨基酸序列第413-419的多肽。偶联到载体蛋白，例如KLH，作为免疫原免疫小鼠后，制备杂交瘤细胞，筛选能够稳定分泌特异性识别2019-nCoV N蛋白且具有生物学活性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 本发明提供了2019-nCoV N蛋白表位肽在制备2019-nCoV N蛋白单克隆抗体或双特异性抗体中的应用，所述2019-nCoV N蛋白表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-5任一所示，或SEQ ID NO.1-5任一所示的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。 本发明提供了2019-nCoV N蛋白表位肽在制备2019-nCoV多肽疫苗中的应用，所述2019-nCoV N蛋白表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-5任一所示，或SEQ ID NO.1-5任一所示的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。 本发明提供了2019-nCoV N蛋白表位肽在制备以2019-nCoV所引起的疾病治疗药物中的应用所述2019-nCoV N蛋白表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-5任一所示，或SEQID NO.1-5任一所示的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。 本发明提供了含有所述2019-nCoV N蛋白表位肽或所述表位肽的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列的多肽疫苗。 本发明提供了一种抗体，其为所述2019-nCoV N蛋白表位肽或所述表位肽的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列的多肽，与载体蛋白偶联后作为免疫原，免疫动物，制备免疫血清得到抗体；或对所述抗体进行改造得到的嵌合抗体。 所述的抗体，其为多克隆抗体、单克隆抗体。 具体的说，本发明以偶联了载体蛋白的多肽分别作为免疫原分别免疫小鼠，采用杂交瘤技术经过细胞融合并筛选得到能持续、稳定分泌特异性识别新冠病毒N蛋白的小鼠单克隆抗体的杂交瘤细胞株，由各细胞株分泌得到2个单克隆抗体，其中由多肽2作为免疫原免疫小鼠获得了单克隆抗体Clone 4G1，由多肽4作为免疫原免疫小鼠获得了单克隆抗体11D5。本发明提供的单克隆抗体分别命名为Clone 4G1和Clone 11D5。 所述单克隆抗体Clone 4G1的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.6和7所示； 所述单克隆抗体Clone 11D5的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.8和9所示； 本发明还提供能稳定分泌上述单克隆抗体的杂交瘤细胞，其为所述2019-nCoV N蛋白表位肽或所述表位肽的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列的多肽，与载体蛋白偶联后作为免疫原免疫动物所得的杂交瘤细胞。 上述杂交瘤细胞所分泌产生的单克隆抗体属于本发明的保护范围。 本发明提供一种药物，其含有上述的抗体。 本发明提供一种2019-n