食品分析与检验重要实验讲解.pdfVIP

实验一：食品中亚硝酸盐的测定 一、实验目的 1. 掌握盐酸萘乙二胺比色法测定亚硝酸盐的原理 2. 掌握分光光度计的使用、标准曲线的绘制及计算方法 3. 了解分光光度计的构造 二、实验原理 样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重 氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为 538 nm，可测定 吸光度并与标准比较定量。 三、仪器与试剂 1. 仪器 （1）分光光度计 （2 ）小型胶肉机 （3 ）恒温水浴锅 2 ．试剂 （1）亚铁氰化钾溶液 (106g/L) ：称取 106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至 1000 mL。 （2 ）乙酸锌溶液 (220g/L) ：称取220.0 g乙酸锌，先加 30mL冰醋酸溶解，用水稀释至 1000 mL。 （3 ）饱和硼砂溶液 (50g/L) ：称取 5.0g硼酸钠，溶于 100mL热水中，冷却后备用。 （4 ）对氨基苯磺酸溶液（ 4g/L ）：称取0.4 ｇ对氨基苯磺酸，溶于 100mL20 % （V/V ） 盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。 （5 ）盐酸萘乙二胺溶液 （2g/L ）：称取 0.2g盐酸萘乙二胺， 溶于 100mL水中 , 混匀后， 置棕色瓶中，避光保存。 （6 ）亚硝酸钠标准溶液（ 200 μg/mL ）：准确称取 0.1000 ｇ于110℃～120℃干燥恒重 的亚硝酸钠，加水溶解移入 500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。 （7 ）亚硝酸钠标准使用液（ 5.0 μg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液 5.00mL， 置于 200mL容量瓶中，加水稀释至刻度。 四、实验步骤 1. 提取 称取2.50g经绞碎混匀的样品， 于50mL烧杯中， 加硼砂饱和溶液 12.5mL饱和硼砂 溶液，搅拌均匀，以 70℃左右的水约 300 mL 将试样洗入 500mL容量瓶中，于沸水浴 中加热 15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。 2. 提取液净化 在振荡上述提取液时加入 5 mL 亚铁氰化钾溶液 , 摇匀 , 再加入 5mL 乙酸锌溶 液，以沉淀蛋白质。加水至刻度 , 摇匀 , 放置30min, 除去上层脂肪 , 上清液用滤纸过 滤, 弃去初滤液 30mL ，滤液备用。 1 3. 亚硝酸盐的测定与数据记录 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 标准使用液体积 mL 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.50 2.00 样品质量 g / 样品提取液体积 mL / 对氨基苯磺酸溶液 2mL(混匀 ,静置 3-5min) 盐酸萘乙二胺溶液 1mL 水 至刻度，混匀，静置 15min 比色测吸光度 2cm 比色皿， 538nm，0 管调零 吸光度 五、结果计算 1. 绘制标准曲线 以亚硝酸钠量（μ g ）为横坐标，与其对应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 2. 用样品提取液的吸光度，在以上亚硝酸钠标准曲线上查出亚硝酸钠的量 ( μg) 。 3. 计算 m’×1000 X= ————————— V 2 m × —— ×1000 V 1 式中： X ——样品中亚硝酸