冰冻切片制作与染色过程中常见问题与处理.pptVIP

* 第一页，共29页 问题思考 组织是否足够新鲜？1w以内？ 灌注固定液、洗液PH值、离子浓度是否合适？ 一抗是选择途径，滴度如何确定的？ 是否阅读过DATASHEET? 保存，有效期，reactivity, Cross-Reactivity ？ 对该蛋白表达和分布有无预期的估计和了解? 是否设了阳性和阴性对照？ 是否排除了自发荧光？ 是不是判读正确？ * 第二页，共29页 一、冰冻切片的优缺点 优点： 简便，快速，用时短 可以不需要对组织固定、脱水、透明、包埋 组织变化不大 能很好保存脂肪，类脂 能够比较完好地保存各种抗原活性及酶类 对有机溶剂或热的温度耐受能力较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好。 缺点： 不容易做连续切片 组织不能过大-不容易冻结或者组织冻结不均 不容易制作较薄的切片 冻结过程中容易产生水的结晶而影响细胞的形态结构及抗原物质的定位 组织结构不如石蜡切片清晰，但是满足科研的要求 针对其缺点要注意操作条件优化，避免错误 * 第三页，共29页 二、切片制作过程中几个关键步骤 1. 动物取材 2. 组织固定 3. 切片制作 4. 切片染色 好的切片制作和染色成功的关键 细节决定成败 固定、漂洗溶液PH值，成分；切片厚度、手感；抗体效价、特异性；切片孵育时间，湿度、温度； 切片判读正确-反映真实的科学现象 知识结构背景 组织学结构的熟悉…… 认识病理改