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猪DIO3基因组织表达谱及印记分析 猪DIO3基因组织表达谱及印记分析 猪DIO3基因组织表达谱及印记分析 摘要：采用荧光定量PCR方法分析了猪DIO3基因在组织中的表达状况。结果表明，DIO3基因主要表达于背部脂肪组织，在肝脏、子宫、肾脏、心脏、小肠、肌肉和胃组织中呈中度表达，在脾脏和肺脏中表达量很低。采用外显子687 bp处的A/C突变（A/C 687）检测该基因在猪胚胎组织中的印记状态，DIO3基因在所有组织中均表现为印记。 关键词：猪；DIO3基因；组织表达谱；印记分析 Expression and Imprinting Analysis of Porcine DIO3 Gene Abstract： Real-time RT-PCR was performed to analyze the porcine DIO3 gene tissue expression pattern. The porcine DIO3 gene was expressed predominantly in backfat， mildly in liver， uterus， kidney， heart， small intestine， muscle and stomach， and almost absent in spleen and lung by realtime fluorescence quantitative PCR. A single nucleotide polymorphism in exon （A/C687） was used to investigate imprinting status in porcine embryonic tissues. The results indicate that DIO3 was imprinted in all the tested tissues. Key words： pig； DIO3 gene； tissue expression； imprinting analysis 甲状腺素脱碘酶Ⅲ（Deiodinase iodothyronine type Ⅲ，DIO3）能够使四碘甲状腺原氨酸（T4）和三碘甲状腺原氨酸（T3）内环脱碘导致甲状腺激素失活[1]，在甲状腺激素代谢过程中起着关键作用[2]。甲状腺激素是调节机体生长发育及调控碳水化合物、脂肪、蛋白质等三大营养物质代谢的重要因子，DIO3基因通过调节甲状腺激素的代谢而影响机体生长发育及营养物质的代谢，因此，DIO3是调控生长发育和营养代谢的重要调节因子。该基因在成人组织中活性很低，且仅表达于皮肤、子宫和脑等组织[3]，但是在蜕膜组织、胎盘组织和胎儿组织中表达量较高[4，5]。 基因组印记是一种基因表达依赖于其亲本来源的表观遗传现象。尽管双亲来源的两条染色体具有相同的遗传序列，但是印记基因只表达一个亲本来源的等位基因[6]。DIO3基因位于Dlk1-Dio3印记簇最远端，在DLK1基因下游-800 kb处[7]。在小鼠中DIO3基因表现为母本印记、父本表达[8，9]。本研究采用PCR-RFLP方法分析了猪DIO3基因的印记状态，并研究其表达模式，为进一步研究猪印记基因对猪生长发育的调控和功能基因的分子遗传机理具有重要的意义。 1 材料与方法 1.1 动物和组织样品 用于印记分析的样品：采集自大白猪和梅山猪正反交后代65日龄胚胎（华 中农业大学试验猪场）的10个部位组织（心脏、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、胃、肌肉、小肠、胎盘和脑），分别提取DNA和RNA。 用于组织表达谱分析的样品：采集自65日龄大白猪胚胎（湖北省农业科学院畜牧兽医研究所原种猪场）的心脏、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、胃、肌肉、脂肪、小肠、子宫等组织，分别提取RNA。 DNA的提取采用传统的苯酚/氯仿提取法。RNA的提取使用Invitrogen公司的TRIzol试剂盒提取。反转录主要按照参考文献[10]中的方法。 1.2 引物设计与PCR扩增DIO3基因 根据猪DIO3基因（GenBank accession No. HQ316945）设计引物进行PCR扩增DIO3基因，引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成，引物序列见表1。 1.3 实时荧光定量PCR 利用DOF/DOR引物，运用实时荧光定量PCR，对猪DIO3基因在65日龄大白猪胚胎的10个部位不同组织（心脏、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、胃、肌肉、脂肪、小肠和子宫）中的表达情况进行分析。实时荧光定量PCR反应体系为25 μL，模板cDNA 50 ng，正、反向引物SYBR