资料第五章酶化学.pptx

第五章 酶化学;1969年，Merrifield等人工合成了具有酶活性的胰RNase。 1982年，Cech和Altman对四膜虫的研究中发现RNA具有催化作用，从而发现核酶 (ribozyme)，打破了以往酶是蛋白质的传统观念。 1986年Schultz和Lerner等人研制成功抗体酶（abzyme）。Boyer和Walker阐明了ATP合酶的合成与分解TAP的分子机制。 近20年来，不少酶的作用机制被阐明，随着基因工程技术的广泛应用，使得酶的结构和功能的研究进入一个新的阶段。现在已鉴定出4000多种酶，数百种酶已经被结晶。 近几十年来，不断有新理论和新概念出现。在分子水平上揭示酶和生命活动的关系，阐明酶在细胞代谢调节和分化中的作用，酶合成的遗传机制，酶的催化机制等。 同时，酶的应用——酶工程也得到快速发展。;5.1 酶的概念、命名和分类;每个酶有两个名称：系统名、惯用名 惯用名：简单、便于使用； 系统名：明确标明酶的底物及催化 反应的性质。;5.1.3 酶的分类 国际酶学委员会根据酶催化反应的类型分类(六大类):;5.1.4 各大类酶的典型作用;5.2 酶的化学本质;根据酶蛋白的组成分类：;按与酶蛋白的结合程度:;5.2.2 酶蛋白的结构 单体酶-monomeric enzyme：一般由一条肽链组成，如溶菌酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等。但有的单体酶有多条肽链组成，如胰凝乳蛋白酶由3条肽链，链间由二硫键相连构成一个共价整体。 寡聚酶-oligomeric enzyme：由2个或2个以上亚基组成，亚基间可以相同也可不同。亚基间以次级键缔合。如3-磷酸甘油醛脱氢酶、乳酸脱氢酶、丙酮酸激酶等。 多酶体系-multienzyme system：由几种酶靠非共价键彼此嵌合而成。主要指结构化的多酶复合体如丙酮酸脱氢酶系、脂肪酸合成酶复合体等。 ;5.3 酶的特性;促使化学反应进行的途径： 用加热或光照给反应体系提供量。 使用催化剂降低反应活化能。;二、 中间产物学说：;2、中间产物;三、酶作为生物催化剂的特性;（二）、具高度专一性;（四）、酶易失活：凡使Pr变性的因素都可使酶破坏,酶在温和条件下作用。;（五）、有些酶的活性与辅酶、辅基 及金属离子有关。辅酶除去，酶失活。;5.4 酶的结构与功能;羧肽酶的活性中心;??性中心的实质;必需基团:酶分子中有些基团若经化学修饰（氧化、还原、酰化、烷化）使其改变，则酶的活性丧失，这些基团称为必需基团。包括活性中心内和活性中心外两类。 非必需基团：有的酶温和水解掉几个AA残基，仍能表现活性，这些基团即非必需基团。;（二）酶活性中心的结构特点;2.酶的活性部位是一个三维实体，具有三维空间结构。 3. 酶的活性部位并不是和底物的形状正好互补的，而是在酶和底物的结合过程中，底物分子或酶分子，有时是两者的构象同时发生了一定的变化后才互补的，此时催化基团的位置正好处在所催化底物键的断裂和即将生成键的适当位置，这个动态辨认过程称为诱导契合（induced-fit）。 4.酶的活性部位位于酶分子表面的一个裂隙（crevice）内。裂隙内是一个相当疏水的环境，从而有利于同底物的结合。 5.底物靠较弱的次级键与酶结合。 6.活性中心的空间构象不是刚性的，在与底物接触时表现出一定的柔性和运动性。 ;（三）研究酶活性部位的方法;（2）特异性共价修饰。 某一种化学试剂专一地修饰酶活性部位的某一氨基酸残基，使酶失活。通过水解分离标记的肽段，即可判断出被修饰的酶活性部位的氨基酸残基。 二异丙基氟磷酸（DFP）能专一性地与酶活性部位的丝氨酸残基的羟基共价结合，使酶活力丧失。 如，DFP与胰凝乳蛋白酶作用（只和活性部位的丝氨酸残基的羟基结合） ;（3）亲和标记法 利用一些与底物结构相似的共价修饰剂。这种修饰剂有两个特点：①可以较专一地引入酶的活性部位，接近底物给合位点。②具有活泼的化学基团，可以与活性部位的某一基团结合形成稳定的共价键。因其作用机制是利用酶对底物的特殊亲和力将酶加以修饰标记，故称为亲和标记。 如，胰凝乳蛋白酶的亲和标记;2、切除法 3、X-射线晶体衍射法 利用X-射线晶体衍射观察溶菌酶三维结构可以看出：溶菌酶活性部位有关氨基酸的排列位置；酶-底物复合物中，底物周围氨基酸的排列状况；根据被水解的糖苷键邻近氨基酸残基的分析，确定了溶菌酶的催化基团为Glu35和Asp52。再如，通过X射线晶体结构分析，表明胰凝乳蛋白酶活性部位由 组成。这3个氨基酸残基联在一起形成一个“电荷中继网，使Ser195的羟基具有非常高的亲核化。;4.定点诱变法;二、酶原的激活;胰蛋白酶的激活;5.5