20141025蛋白芯片点样测试2.pdfVIP

蛋白芯片点样测试 1、将制备的围栏贴于普通载玻片上。 2、将超声波细胞粉碎的蛋白按顺序加入围栏孔中（ 1 μl/ 孔），每个黄 色框里为一种蛋白。检测抗原 28 份，阳性对照 1 份，阴性对照 1份， 空白对照 1 份。 3、将玻片放入真空恒温干燥箱过夜干燥。 4、用 PBST 清洗液（ 1×PBS+0.1% Tween20）清洗 5min ×3，离心甩 干。 5、 一抗：将血清按 1 μl 血清 +2 μl pET32c +97 μl 1 PBS× 稀释， l00 μl/ 份，按顺序加入围栏孔中（ 1 μl/ 孔）。 6、放入孵育盒中 37℃反应 1h。 7、用 PBST 清洗液清洗 5min ×3 ，离心甩干。 8、荧光二抗工作浓度： Alexa Fluor 546 (2 mg/ml 用蛋白点样液按 1:1000稀释，按顺序加入围栏孔中（ 1 μl/ 孔）。 ※蛋白点样液： 40%甘油， 0.01%-0