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大题分析与表达练7基因工程类大题突破
(2021山东日照二模)新型冠状病毒主要通过其表面刺突蛋白(S蛋白)与人体细胞膜上的ACE2蛋 白结合实现感染。截至2021年4月12日,中国成为全球首个能提供三种生产新型冠状病毒疫苗技 术路线(灭活疫苗、重组蛋白疫苗和腺病毒载体疫苗)的国家。三种新型冠状病毒疫苗研发途径的技 术原理如下:灭活疫苗是用各种理化方法灭活病原微生物及其代谢产物,再通过纯化等步骤制备出相 应疫苗;重组蛋白疫苗是将病毒的目标抗原基因整合到表达载体中,然后将表达载体转化到中国仓鼠 卵巢细胞中,经诱导表达出大量的抗原蛋白,再通过纯化而得到的疫苗;腺病毒载体疫苗是以腺病毒作 为载体,将目标抗原基因重组到载体病毒基因组中得到的疫苗。回答下列问题。
上述灭活疫苗中的“灭活”是使新型冠状病毒失去 ,但并不破坏该病毒
的 o
制备重组蛋白疫苗和腺病毒载体疫苗均需要获取S蛋白基因,获取过程是提取新型冠状病毒总
RNA,在 酮的作用下合成DNA,再采用PCR技术选择性扩增出S蛋白基因。PCR技术的前
提是要有一段 ,以便根据这一序列设计出特异性的引物。
腺病毒载体疫苗是将S蛋白基因重组到改造后的腺病毒内,导入人体,在体内产生S蛋白,刺激人体
产生相应抗体。改造后的腺病毒载体应具备的条件是 (答出两点
即可)。与重组蛋白疫苗相比,腺病毒载体疫苗的优点体现在 o
腺病毒载体疫苗注入人体后,其发挥作用的机理是
(2021山东青岛二模)基因工程抗体又称重组抗体,是指利用重组DNA及蛋白质工程技术对编码抗 体的基因按不同需要进行加工改造和重新装配,经转染适当的受体细胞所表达的抗体分子。下图为 某研究所制备小鼠抗甲型肝炎病毒抗体的流程图。回答下列问题。
EcoR IEcoRV青霉索 抗性基 因EcoRVBa mH I lacZ基因
EcoR I
EcoRV
青霉索 抗性基 因
EcoRV
Ba mH I lacZ基因
导入骨髓瘤细胞
wmm
EcoRV EcoR I
筛选
④]
注射到小鼠腹腔
⑤] 一 提取抗体
实验室构建重组质粒时,为保证目的基因与载体的正确连接,过程①最好选择的限制酶
是 O
在重组质粒中,目的基因首端的启动子能够 ,从而驱动目的基因的转
录。除启动子之外,重组质粒还应该包含 等。
⑶为了筛选出导入目的基因的骨髓瘤细胞,可以在过程③的培养液中添加 ,过程③所获得的
细胞具有 的特点。
(4)临床试验发现,过程⑤提取的小鼠抗甲型肝炎病毒抗体具有外源性,容易被人体的免疫系统清除,从 而导致其治疗效果大大降低。下图抗体中的A区是与抗原特异性结合的区域,B区是引起人体免疫 反应的区域。若要避免小鼠抗甲型肝炎病毒抗体被人体免疫系统清除,请提出合理的改造思路。
? a区
(2021山东德州二模)某研究小组从土壤中分离获得能分解纤维素的细菌(A菌),从A菌中提取出一 种纤维素酶基因(CBH〃,氐度为1.4 kbp)并进行PCR扩增,然后与高效表达载体pUT质粒(长度约为 11.7 kbp)连接构建成重组质粒并导入A菌,从而获得分解纤维素能力更强的工程菌(B菌)。回答下列 问题。
(1) 采集土样时,可以选择树林中多年落叶形成的腐殖土,原因
是 。采集到的样品加无菌水稀释后 (填“需要”或“不
需要”)进行灭萌处理。
(2) CBH 〃基因两端需添加相关酶切位点才能与图1所示的pUT质粒连接,因此扩增C8H 〃基因时需
在两种引物上分别添加 序列和 序列。
BstEHSac]Msp IBa mH I图1抗生素M 抗性基因
BstEH
Sac]
Msp I
Ba mH I
图1
抗生素M 抗性基因
终止子
抗生素N 抗性基因
高效表达启动子
pUT质粒
(ll?7bp)
限制酶
识别序列及酶切 位点
Bg/ II
A^GATCT
BsfE II
GIGTAACC
Sac I
G^AGCTC
Msp I
OCGG
BarnH
I
GGATCC
Bg/U
为了鉴定重组质粒是否构建成功,将重组质粒导入A菌,并将其接种在含 的培养基中
培养,然后提取3个不同菌落的质粒分别进行双酶切验证,将酶切片段和C8H〃基因分别进行电泳,结
果如图2所示。据此分析,菌落中成功导入了重组质粒。标ffiDNA
果如图2所示。据此分析,菌落
中成功导入了重组质粒。
标ffiDNA CBHII 1 2 3
23 130 bp
9416bp
4 557 bp
4 361 bp
2 233 bp
1 356 bp
1 120 bp
图2
为检测B菌的纤维素分解能力,将含有质量分数为20%的纤维素的培养基分为3组,一组接种B 菌,一组不作处理,一组接种 ,在相同条件下培养一段时间,测定培养基中纤维素含量,结果如
图3所示,说明
(2021山东聊城二模)菊天牛是菊花的主要
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