细胞传代培养的原理及操作步骤,细胞冻存,细胞复苏..pdfVIP

细胞传代培养的原理及操作步骤 (一原理 :细胞在培养瓶长成致密单层后 ,已基本上饱和 ,为使细胞能继续生长 ,同 时也将细胞数量扩大 ,须进行传代再培养。传代培养也是一种将细胞种保存下去的 方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可 以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 (二细胞传代培养具体操作 1、细胞 :贴壁细胞株 2、操作步骤 1将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 2 加入 0.5-1ml 0.25%胰酶溶液 ,使瓶底细胞都浸入溶液中。 3 瓶口塞好橡皮塞 ,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移 ,原贴壁的细胞逐 渐趋于圆形 ,在还未漂起时将胰酶弃去 ,加入 10ml 培养液终止消化。 观察消化也可以用肉眼 ,当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般 室温消化时间约为 1-3 分钟。 4 用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液 ,分到另外两到三瓶中 ,实践培养液塞好橡皮 塞 ,置 37℃下继续培养。第二天