高中生物竞赛：第5章酶课件.pptVIP

四种测活方法及优缺点： 操作复杂，代价昂贵 灵敏度高 底物用放射性同位素标记 同位素测定法 灵敏度相对较低 (nmol/l) 操作简便，节省时间和样品，可用于动力学监测 底物、产物或指示剂在紫外或可见光部分吸光度不同 分光光度法 电化学方法 荧光法 方法 仅适用于有H+生成或消耗的反应 操作比较简便 用pH计跟踪H+浓度的变化 易受其它物质（特别是蛋白质）干扰 灵敏度高 底物、产物的荧光性质有差别 缺点 优点 原理 酶活力的测定 * 酶的分离纯化 1．选材 2．破碎细胞 3．抽提 4．去核酸、去多糖 5．提纯 6．保存 * 酶的分离纯化 酶的分离纯化方法就是常用来分离纯化蛋白质的方法，酶的分离纯化与普通蛋白质相比，要求更加严格。 衡量指标： a. 总活力（回收率） b. 比活力（酶的纯度指标） 每次比活力 纯化倍数= ——————— 第一次比活力 每次总活力 回收率= ———————x100% 第一次总活力 * （三）酶和某些疾病的治疗关系密切 许多药物可通过抑制生物体内的某些酶来达到治疗目的。 通过阻断相应的酶活性，以达到遏制肿瘤生长的目的。 酶还可以直接用于治疗目的。 * 二、酶在医学上的应用领域广泛 （一）酶作为试剂用于临床检验和科学研究 酶法分析即酶偶联测定法(enzyme coupled assays)，是利用酶作为分析试剂，对一些酶的活性、底物浓度、激活剂、抑制剂等进行定量分析的一种方法。 1．酶法分析是以酶作为工具对化合物和酶活性进行定量分析的一种方法 * 2．酶标记测定法是酶学与免疫学相结合的一种测定方法 酶标记测定法是利用酶检测的敏感性对无催化活性的蛋白质进行检测的一种方法。 酶可以代替同位素与某些物质相结合，从而使该物质被酶所标记。 通过测定酶的活性来判断被其定量结合的物质的存在和含量。 当前应用最多的是酶联免疫测定法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）。 * 3．工具酶广泛地应用于分子克隆领域 除上述酶偶联测定法外，人们利用酶具有高度特异性的特点，将酶做为工具，在分子水平上对某些生物大分子进行定向的分割与连接。 * （二）酶的分子工程是方兴未艾的酶工程学 酶分子工程主要是利用物理、化学或分子生物学方法对酶分子进行改造，包括对酶分子中功能基团进行化学修饰、酶的固定化、抗体酶等等，以适应医药业、工业、农业等的某种需要。 * 1．固定化酶是固相酶 固定化酶 (immobilized enzyme) 是将水溶性酶经物理或化学方法处理后，成为不溶于水但仍具有酶活性的酶衍生物。 固定化酶在催化反应中以固相状态作用于底物，并保持酶的高度特异性和催化的高效率。 * 提示：A—b—Ⅰ　B—a—Ⅱ　C—c—Ⅲ 2．抗体酶是具有酶活性的抗体 将底物的过渡态类似物作为抗原，注入动物体内产生抗体，则抗体在结构上与过渡态类似物互相适应并可相互结合。该抗体便具有能催化该过渡态反应的酶活性。当抗体和底物结合时，就可使底物转变为过渡态进而发生催化反应。 这种具有催化功能的抗体分子称为抗体酶(abzyme)。 活性中心 * 调控酶(Regulatory Enzymes) These regulatory enzymes exhibit increased or decreased catalytic activity in response to certain signals. 别构酶(Allosteric enzymes) 共价调节酶(Covalently modulated enzymes) 酶原 (Proenzyme) * 变构效应剂 (allosteric effector) 变构激活剂 变构抑制剂 变构调节 (allosteric regulation) 变构酶 (allosteric enzyme) 变构部位 (allosteric site) 一些代谢物可与某些酶分子活性中心外的某部分可逆地结合，使酶构象改变，从而改变酶的催化活性，此种调节方式称变构调节。 （一）变构酶通过变构调节酶的活性 一、调节酶实现对酶促反应速率的快速调节 * 变构酶常为多个亚基构成的寡聚体，具有协同效应，V-S相关曲线呈S型。 酶的变构调节是体内快速调节的重要方式之一。 变构酶的Ｓ形曲线 变构激活 无变构效应剂 变构抑制 * 蛋白激酶A的变构调节 * （二）酶的化学修饰调节是通过某些化学基团与酶的共价结合与分离实现的 在其他酶的催化作用下，某些酶蛋白肽链上的一些基团可与某种化学基团发生可逆的共价结合，从而改变酶的活性