DNS法测定总糖和还原糖.docxVIP

实验九 总糖和还原糖的测定（二） ──3,－5 二硝基水杨酸法 一、目的要求： 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。 二、实验原理: OH NO2OH NH2HOOC+ 还原糖HOOC OH NO 2 OH NH 2 HOOC + 还原糖 HOOC NO 2 NO 2 (DNS) （3－氨基－5－硝基水 杨酸） ? 黄色 桔红色 三、试剂和器材 1、试剂 （1）1 mg/ml 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg ，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为 1.0mg/ml。 （2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取 6.3 g 3,—5 二硝基水杨酸并量取 262 ml 2mol/L NaOH 加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于 500 ml水中），再加 5 g结晶酚和 5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到 1000 ml贮于棕色瓶中。 碘－碘化钾溶液：称取 5g 碘，10g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水中。 （4）6N NaOH ：称取 120g NaOH 溶于 500ml 蒸馏水中。 （5）0.1% 酚酞指示剂。 （6）6 mol/L HCl溶液 2、材料 小麦淀粉或玉米淀粉。3、器材 分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。 四、操作方法 1、葡萄糖标准曲线制作 取 8 支 15mm× 18