转染一般疑难解答.pdfVIP

问 题 可能原因 解决建议 转染效率低 没有使用优化 选择针对您的细胞类型转染效率可能最高的阳离子脂质体试剂。参见附录 A 或我 的阳离子脂质 们公司网站（）上“ Transfection Collection ”中的参考文献列表。 体试剂。 没有使用优化 优化阳离子脂质体试剂和 DNA的量。参见第 7 章优化步骤。参见我们的网站（在 条件。 Tech-online 分子生物学部分）上的细胞特异性的转染步骤。 DNA-阳离子脂 在复合体形成时不要使用血清。 OPTI-MEM I 培养基和 DMEM是用于复合体形成的 质体试剂复合 较好的培养基。 物在存在血清 如果使用含有血清的培养基进行转染，保证在无血清条件形成复合物。 条件下形成。 注意：不要将 OPTI-MEM I 培养基用于 LIPOFECTAMINE PLUS试剂或昆虫细胞。对 于 Sf9 和 Sf21 细胞， Sf-900 Ⅱ SFM 会得到最佳结果。 存在抑制剂。 不要在用于制备 DNA-阳离子脂质体复合物的培养基中使用抗生素， EDTA，柠檬酸 盐，磷酸盐， RPMI，硫酸软骨素，透明质酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。 不恰当的细胞 细胞密度应该在转染时融合度为 70%-90%。 密度。 转染 DNA的启 确保转染 DNA的启动子 - 增强子同目的细胞类型兼容。 动子 - 增强子 没有被宿主细 胞识别。 阳离子脂质体 不要使用冻结的或储存温度低于 4℃的阳离子脂质体试剂。 试剂冻结。 转染分析的问 转染分析中加入阳性对照。 题。 质粒纯化的问 请核对是否使用转染级的质粒纯化试剂盒。通常转染级的质粒纯化试剂盒使用 题。 DEAE树脂而非硅树脂，并且最好是用重力流动（过滤）的方法而不是离心技术， 因为树脂带来的污染会导致较高的内毒素。另一种方法（可用于任何级别的纯化 试剂盒），是在最后一步从树脂柱上洗脱质粒后，将溶液置于 55 ℃的水浴上保温 5 分钟。最后小心地从上至下吸取 2/3 的溶液（不要碰到底部）使用。这是减少 树脂的交叉污染的方法。 细胞死亡率 DNA量太高。 作一个剂量 - 反应曲线以确定最佳的 DNA量。在剂量 - 反应转染中加入阳离子脂质 高。 体试剂，因为单独 DNA也会对细胞生长有一个基础的影响。参见第 7 章微调／优 化方法。 阳离子脂质体 作一个剂量 - 反应曲线以确定最佳的阳离子脂质体试剂的量。在剂量 - 反应转染中 试剂量太高。 加入 DNA，因为单独阳离子脂质体试剂也只对细胞生长有一个基础的影响。参见 第 7 章微调／优化方法。 在转染过程中 在转染过程中不要使用氯霉素，青霉素或链霉素，因为阳离子脂质体试剂使细胞 使用抗菌素。 更敏感。 细胞太少。 作一个剂量 - 反应曲线以确定每个转染过程中最佳的细胞数量。根据您的应用所 要求的效率调整细胞数量。 在无血清条件 使用 OPTI-MEMⅠ培养基。