原创力文档- 1、本文档共2页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
查看更多
miRNA RT-PCR 引物设计原理
对于miRNA RT-PCR 实验来说，最核心的实验原理和步骤就是miRNA 引物
设计思路。
之前大家熟知的miRNA RT-PCR 引物主要有两种类型：
1、 Oligod(T)特异的RT 引物（QIAGEN 产品为主）
由特异序列＋(T)20 左右＋兼并碱基V 或VN 组成。（所有miRNA 可以公用一个
Oligod(T)的RT 引物，但是RNA 在反转录前需要进行末端Poly(A)加尾）
2、茎环状结构的RT 引物（ABI 产品为主）
由可以自身呈环茎状的特异序列＋6 到8 个 miRNA3’端反向互补碱基组成。(一
条miRNA 序列特异对应一个茎环状结构的RT 引物）。
这里主要给大家介绍美国signosis 公司的一种新方法。
基于自有专利技术，美国 Signosis 开发了一种高灵敏、高分辨的实时 PCR
方法，用于检测miRNA 的表达，其应用寡核苷酸连接和基于实时PCR 的SYBR
gr n 。该方法可用于总RNA 或细胞裂解物中的miRNA 表达的定量分析，无需
进行cDNA 转换。
该方法中，靶miRNA 分子与二对oligo 连接，形成RNA/DNA 复合物。当序
列完全匹配时，这二对oligo 与miRNA 连接，二对oligo 的节点通过DNA 酶连接。
miRNA 之间单个寡核苷酸的差异就会阻止杂交或连接。寡核苷酸对连接上后，连
接分子可进行实时PCR。
以下是signosis 新方法的原理图：
Signosis 的新方法有效地解决了许多同源miRNA 中只有单个碱基的不同而
无法分辨的问题。并且省去了反转录成cDNA 的步骤，同时配有相应的细胞裂解
液产品使实验更简便、更可靠。
想了解更多关于该方法的信息可登陆signosis官方网站：
/
中国总代网站：
/
文档评论（0）