77人禽流感实验室检测技术方案.pdfVIP

附 7 禽流感实验室检测技术方案 一、实验室网络设置 实验室网络由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流 感中心和省级流感实验室两级组成。 二、实验室条件及生物安全操作的要求 1．省级流感实验室实验条件及生物安全的操作要求 （1）实验生物安全要求：安全Ⅱ级+ （BSL-2 级+）或安全Ⅲ级 （BSL-3 级）。 （2）特异性H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测、血清学检测中用到的 血凝抑制实验（HI）可以在安全Ⅱ级+ （BSL-2 级+）实验室里操作。 （3）特异性H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测在安全Ⅱ级+ （BSL-2 级 +）实验室的生物安全柜里提取病毒的核酸，进行病毒核酸检测的实 验室要求请参照国家有关核酸检测要求的规定。 （4）微量中和实验、特异性H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测阳性的 采样标本的病毒分离、尸检标本的检测必须在安全Ⅲ级（BSL-3 级） 实验室里操作。 （5）省级流感实验室实验条件：具备进行禽流感相关临床标本 初筛所需的生物安全柜、离心机、PCR 仪、电泳仪、紫外线检测仪等 配套设备。 2．国家流感中心 1 实验生物安全要求：生物安全Ⅱ级+ （BSL-2 级+）和生物安全Ⅲ 级（BSL-3 级）实验室。 3．省级流感实验室职责 （1）禽流感标本特异性H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测； （2）禽流感H5 的血清学检测工作; （3）特异性H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测阳性标本的病毒分离必 须在生物安全Ⅲ级（BSL-3 级）实验室； （4）没有生物安全Ⅲ级（BSL-3 级）实验室的，将标本送国家 流感中心做病毒的分离工作。 4．国家流感中心实验室职责 （1）国家流感中心设立在中国疾病预防控制中心病毒病预防控 制所流感室； （2）对各省报告的禽流感疑似病例或确诊病例进行复核、确认； （3）对不具备禽流感病毒分离条件的省份送检标本的检测、分 离和确认； （4）对需要做微量中和实验的血清标本进行微量中和试验； （5）对各省级实验室检测人员的培训； （6）对各省级流感实验室的质量控制。 三、原始标本采集 1．标本采集人员 医疗机构的医生、护士或当地疾病预防控制中心专业人员负责标 本采集并填写标本登记表，标本采集人员按照《禽流感职业暴露人员 2 防护指导原则》做好个人防护。 2．标本采集种类和时限 （1）采集标本的种类：疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液、 血清以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物。 （2）采集标本时间： 1）咽、鼻拭子或含漱液在发病的头3 天采集； 2）急性期血清在发病后7 天内采集，恢复期血清在发病后 2-4 周采集； 3）尸检标本尸检时采集。 3．标本的运送：所有采集的标本应在医院采集时立即分装，一 式二份，其中一份单独保存，以备复核。采集的标本若不能在 24 小 时内送达，则应尽快在－70 ℃以下保存。无－70 ℃条件的需在－20 ℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。 4．标本采集的方法：详见国标《流行性感冒诊断标准及处理原 则》 四、送流感中心的标本包装、运送与接收 1．标本的包装 （1）标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里， 拧紧。 （2）将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；每袋装一 份标本。 （3）直接在塑料管上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、 3 编号、姓名，同时也将标本有关信息填在禽流感人体标本送检登记表， 连同塑料管用另一塑料袋密封。 （4）将装标本的密封袋放入专用运输箱内（或疫苗冷藏包），放 入冰排，然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料。同一 患者 2 份以上的密封标本，可以放在同一个塑料袋内再次做密封。若 将进行病毒分离，可将密封好的装有标本的容器直接放入液氮运