生化药品生产技术应用.ppt

冷冻干燥机 　１、生物制药中分离制备方法的特点 （1）生物材料组成非常复杂。一种生物材料常含成千上万成分，各种化合物的形状、大小、分子量和理化性质都各不相同。没有固定操作方法。 五、 生化物质的分离纯化方法 （2）有些化合物在生物材料中含量极微，只达万分之一，甚至百万分之一。因此，分离操作步骤多，不易获得高收率。 （3）生物活性物质离开生物体后，易变性，破坏，分离进程必须十分小心的保护这些化合物的生理活性。 （4）生物制药的分离方法几乎都在溶液中进行，各种参数（温度，pH，离子强度）对溶液中各种组分的综合影响常常无法固定，以致许多实验设计理论性不强。 （5）为了保护目的物的生理活性及结构上的完整性，生物制药中的分离方法多采用温和的逐级分离方法。亲和层析分离具有分离的专一性，高效性。 （6）生物产品最后均一性的证明与化学纯度的概念不完全相同，因生物分子对环境反应十分敏感，结构与功能关系比较复杂。 ２、 基本原理 （1）根据分子形状和大小不同进行分离： 如差速离心与超离心、 膜分离（透析，电渗析）与超滤， 凝胶过滤法。 （2）根据分子电离性质的差异性进行分离。如离子交换法，电泳法，等电聚焦法。 （3）根据分子极性大小及溶解度不同进行分离。 如溶剂提取法， 逆流分配法， 分配层析法， 盐析法， 等电点沉淀法， 及有机溶剂分级沉淀法。 （4）根据物质吸附性质的不同进行分离。 如选择性吸附法 吸附层析法。 （5）根据配体特异性进行分离：亲和层析法。 ３、分离纯化的基本程序和实验设计 生物体内某一组分，特别是未知结构的组分的分离制备设计大致上分为五个基本阶段。 （1）确定制备物的研究目的及建立相应的分析鉴定方法。 （2）制备物理化性质稳定性的预备试验。 （3）材料处理及抽提方法的选择。 （4）分离纯化方法的摸索。 （5）产物均一性测定。 　 ⑴分离纯化早期使用方法的选择 早期分离纯化用萃取，沉淀，吸附等一些分辨力低的方法较为有利，这些方法负荷能力大，分离量多兼有分离提纯和浓缩的作用，为进一步分离纯化创造良好的基础。 ４、分离纯化的策略： ⑵各种分离纯化方法的使用程序 在相同或相似条件下连续使用同一种分离方法就不太适宜。 在安排纯化方法顺序时，还要考虑到有利于减少工序，提高效率。（盐析－吸附，吸附－盐析） 对于一未知物通过各种方法的交叉应用，有助于进一步了解目的物的性质。 ⑶分离后期的保护性措施 在分离操作的后期必须注意避免产品的损失，主要损失途径是器皿的吸附，操作过程样品液体的残留，空气氧化和某些事先无法了解的因素。 ５、分离纯化方法步骤优劣的综合评价 分辨能力 重现性 回收率 比活性 　　　 离心技术 沉降作用—悬浮液静置时，在重力作用下，密度大于周围溶液的固体颗粒逐渐下沉，称为沉降作用。 离心技术—在离心力场作用下，加速悬浮液中固体颗粒沉降速度的方法称为离心技术。 相对离心力—通常用离心力与重力的比值表示离心机的离心能力，也称分离因素，用符号×g或g表示。 r为离心转子的半径距离，以cm为单位； g为地球重力加速度（980cm/sec2）； N为转子每分钟的转数（rpm）。 离心机 1．按转速高低来分 （1）普通离心机，小于6000rpm （2）高速离心机，8000~25000rpm （3）超速离心机，25000~80000rpm 2．按工作性质分类 （1）制备型离心机 （2）实验室用离心机 3．按操作方式分类 （1）连续离心机 （2）人工卸料（出渣）离心机； （3）自动卸料离心机（如螺旋式离心机） 卧式螺旋卸料沉降离心机 膜分离技术 分离范围 分离动力 一般过滤 1μm 压力差 微孔过滤 0.01~ 1μ m 压力差 透析 5~100? 分子扩散 超级过滤 5~100? 压力差 反渗透 5? 压力差 电渗析 5? 电能 3.有效成分的含量 （1）合适的生物品种：催乳素，哺乳动物 （2）合适的组织器官 ：胃蛋白酶，胃 （3）生物的生长期：胸腺素，幼龄动物 （4）合适的种属：人，猪 （5）合适的生理状态：胰岛素，饭后 生理活性物质易失活与降解，采集时必须保持材料的新鲜。防止腐败、变质与微生物污染。如胰脏采摘后要立即速冻，防止胰岛素活力下降。 保存生物材料的主要方法有速冻、