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冰冻切片的注意事项 2015年11月 温度：冷冻组织中水分起填充作用，使组织迅速变硬，由于各种组织所含水分多少不同，因此所要求的适宜温度不同。含水分较多的疏松组织易冻结，而含脂肪较多的组织难冻结。  样品头温度 冷冻箱温度 肝 -15℃ -20℃ 脾 -10℃ -20℃ 肠 -20℃ -20℃ 卵巢 -15℃/-20℃ -20℃ 肾脏 -15℃ -20℃ 甲状腺 -15℃ -20℃ 乳腺 -20℃ -20℃ 带脂肪的皮肤 -40℃ -30℃ 脂肪 -50℃ -30℃ 脑 -10℃ -20℃ 如组织块温度太低，组织片容易卷曲和碎裂，此时可把大拇指置于组织块上几秒钟，升高组织块温度。 如组织块温度太高，组织片易皱褶，可将速冻台置于组织面上几秒钟以快速降温。 脂肪组织：因脂肪不会结冰，因此脂肪组织在制作冰冻切片时尤为困难。 解决办法：只有将温度降低，让脂肪变硬。如果是脂肪组织与非脂肪组织混合存在，温度可降至-25℃；如果是纯脂肪组织，则降至-50℃. 切片上有条纹：垂直于刀片上的细条纹，考虑是刀片缺口所致，可能是由于钙化组织、缝线引起；如出现宽条纹或组织缺损，则可能是由于刀片下粘附有组织残渣。 波浪线样的皱褶：可能是由于切片机内某个零件松动所致。检查支撑刀片的刀架，冷冻头等有无松动。 切片卷缩：常见原因 1:放卷板位置不正确/放卷板较脏/放卷板有缺口 2:切片刀温度不够低 3:切片刀钝/粘附有组织残屑 4:组织硬度不够 解决对策： 1:调整放卷板位置，使其切片可以顺畅通过 2:盖上冷冻室盖，让刀片温度降低 3:及时清洁刀片，更换刀口 4:降低组织块温度，使其硬度适当 5:用OCT/胶水包埋组织，有利于防止切片卷缩 切片脱落：常见原因 1:组织内坏死组织多 2:固定液温度低 3:载玻片不干净/温度低 4:切片太厚 解决对策： 1:取材时：尽量避免坏死组织，如必需取材，则可用酒精灯/电吹风将切片吹干防脱 2:定期更换固定液，将固定液瓶盖盖好，防止固定液挥发而使其浓度降低 3:保持载玻片干净，置于室温 4:切片不应太厚（5um），脂肪可厚些 切片过程中的注意事项： ①防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸张擦。有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。 ②多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。 ③放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，所谓“砍柴看柴势”，切片也是如此，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。 ④组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液，在未达到固定前，更不能使用。临床快速冰冻切片，不须要预先固定，一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。 如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就会出现冰晶。这是因为含水的固定液在组织未经固定前，其中的水份也可渗入到组织中去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组织中，形成了冰晶。 ⑤