微生物工程工艺原理 五 氨基酸发酵机制.pptxVIP

第五章 氨基酸发酵机制;第五章 氨基酸发酵机制;第五章 氨基酸发酵机制;谷氨酸生产菌能够在体外积累菌体最大生长需要量300多倍的谷氨酸，研究发现：大量积累是由于： ①代谢调节控制； ②细胞膜通透性的特异调节； ③发酵条件的适合； ;一、谷氨酸生物合成途径及调节机制;第五章 氨基酸发酵机制;（一）EMP途径、HMP途径;（二）TCA、DCA和CO2固定作用;葡萄糖;2.DCA环（乙醛酸循环）：;3.CO2固定;;（三）氨的导入;二、细胞膜通透性控制;C17酸(佶抗);三、菌种选育模型与控制方法;1.从生物素入手：;选育生物素缺陷型菌株 限制外源性生物素供应 （适量 ～ 贫乏）;2.选育油酸缺陷型;微生物的代谢产物可分为： 初级代谢产物：微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质。 特征：不同的微生物初级代谢产物基本相同；初级代谢产物合成过程是连续不断的，与菌体的生长呈平行关系。;次级代谢产物：微生物生长到一定阶段才产生的化学结构十分复杂、对该微生物无明显生理功能，或并非是微生物生长和繁殖所必需的物质。 特征：不同的微生物次级代谢产物不同；次级代谢产物的通常在菌体的生长后期合成；在多数情况下，增加前体是有效的。;一、微生物代谢的自我调节;（一）酶活性的调节;1.酶活性的激活;2.酶活性的抑制;反馈抑制的类型;分支代谢途径中的反馈抑制。;（1）同功酶调节 同功酶 能催化相同的生化反应，但酶蛋白分子结构有差异的一类酶，它们虽同存于一个个体或同一组织中，但在生理、免疫和理化特性上却存在着差别。;;;（3）累积反馈抑制： 催化分支合成途径第一步反应的酶有几种末端产物抑制物，但每一种如过量，按一定百分率单独抑制共同途径中的第一个酶活性，总的抑制效果是累加的，各末端产物所起的抑制作用互不影响，只影响这个酶促反应的速率。;第五章 氨基酸发酵机制;（4）增效反馈抑制：代谢途径中任何一种末端产物过量时，仅部分抑制共同途径中的第一个酶活性，但两个末端产物同时过量时，其抑制作用可超过各产物存在的抑制能力的总和。;（5）顺序反馈抑制：每个分支末端产物抑制分支后的第一个酶，产生部分???制作用。通过逐步有顺序的方式达到的调节。 ;（二）酶合成的调节（酶量）;1.诱导 诱导酶：某些酶只有在它们催化的底物（或底物的结构类似物）存在时才能合成，此种酶称为诱导酶。 诱导酶是细胞为适应外来底物或其结构类似物而临时合成的一类酶。;能促进诱导酶产生的物质称为诱导物，它可以是该酶的底物，也可以是难以代谢的底物类似物或是底物的前体物质。分外源诱导物：外源加入的；内源诱导物：菌体代谢途径的某些中间产物也能诱导该途径的某些酶系的合成，这些中间产物称为内源诱导物。;;酶的诱导合成类型;2.阻遏 当代谢途径中某末端产物过量时，通过阻遏作用来阻碍代谢途径中包括关键酶在内的一系列酶的生物合成，从而更彻底地控制代谢和减少末端产物的合成。;反馈阻遏：代谢终产物达到一定浓度时，反馈阻遏该代谢途径的一种或几种酶的生物合成。 阻遏的类型主要有两种: 末端代谢产物阻遏 分解代谢产物阻遏。;（1）末端产物阻遏;对分支代谢途径来说，情况较复杂。 每种末端产物仅专一地阻遏合成它的那条分支途径的酶。 多价阻遏：有两种或两种以上的末端产物的分支代谢途径中，当分支代谢途径中的几种末端产物同时过量就反馈阻遏其分支点以前的共同途径的“公共酶”的合成，仅一种产物过量无阻遏作用。;（2）分解代谢产物阻遏;分解代谢物的阻遏作用，并非由于快速利用的底物本身直接作用的结果，而是通过其分解过程中所产生的中间代谢物所引起。即：代谢反应链中，某些中间代谢物或末端代谢物的过量累积而阻遏代谢途径中一些酶的合成。如葡萄糖效应。;两种调节的对比;;R曲线 合成系统，如磷酸果糖激酶、柠檬酸合成酶等。 U曲线 消耗ATP的酶系，柠檬酸裂解酶、磷酸核糖焦磷酸合成酶等。 当能荷≥0.75，合成受到抑制，酶活性急速下降，消耗ATP的酶活性急速上升。两系统在0.85处交叉，酶系达到平衡。 这种现象存在于许多生长状态的细胞中。细胞通过调节腺苷酸的比例，来协调分解代谢与合成代谢的代谢速率。 ;二、代谢调控;初级代谢产物控制比较简单。它的形成一般只需要营养条件即可生成。 通过改变发酵工艺条件如pH、温度、培养基组成和微生物遗传特性等，达到改变菌体内的代谢平衡，过量产生所需要产物的目的。 ;（一）发酵条件的控制;2.使用诱导物 如：在木霉发酵生产纤维素酶中，加入槐糖可以诱导纤维素酶的产生；木糖可以诱导半纤维素酶的生成。青霉素酰化酶可用苯乙酸为诱导物。;3.添加生物合成的前体;4.培养基成分和浓度的控制;（二）改变细胞透性;（三）改变菌种的遗传特性;