高效液相色谱操作步骤.ppt

高效液相色谱仪的应用; ; ;一：流动相的配制;二：样品处理;;四：放置流动相;依次打开： 稳压器 柱温箱 高压泵 检测器 计算机电源开关;排气;作用：平衡活化色谱柱并清除管路中的杂质和残留的水分。 步骤：分析样品前先用甲醇或乙腈冲洗流路20min~30min 如果流动相为有机相和纯水相的混合液，在用甲醇或乙腈冲洗流路后，按照分析样本的需要调节比例阀的比例，冲洗流路约20min； 如果流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其他电解质，则应该用与分析样品流动相中缓冲盐溶液或有机酸、无机酸、其他电解质与有机相相同比例的水加有机相冲洗流路约20min以上，再按照分析样品的需要调节有机相与缓冲溶液等的比例冲洗流路约20min，平衡进样环境。 简而言之：根据流动相的不同选择不同的溶液冲洗流路。 具体问题具体分析！;八：设定分析方法;九：进样分析;1：根据样品的出峰时间定性 2：根据样品的峰面定量 （在一定的色谱操作条件下，流入检测器的待测组分的含量、质量或浓度与检测器的响应信号：峰面积或峰高成正比。） ;1：冲洗流路和色谱柱 a:若流动相为有机相和超纯水的混合溶剂，则直接用甲醇或乙腈冲洗流路约30min，待基线无杂质峰出现走平稳后可停泵关机。 b:若流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其他电解质溶，则先用5%甲醇冲洗流路30~60min，其次用50%甲醇溶液冲洗流路约30min，再用甲醇或乙腈冲洗流路约30min，待基线无杂质峰出现走平稳后可停泵关机。 2：冲洗进样系统 a:清洗手动进样阀，将手动进样阀的扳手逆时针扳到头，用一次性平头微量注射器吸入2~4ml的50%甲醇，注入手动阀的进样口。 b:每次样品测定完后，一定要用50%甲醇清洗；若样品水系，则先用超纯水清洗，再用50%甲醇清洗。;依次关闭检测器的氘灯 将高压泵的流速降为“0” 关闭检测器开关 关闭高压泵开关 关闭仪器色谱工作站 关闭检测器电源开关 关闭高压泵电源开关 关闭柱温箱电源开关 关闭电脑开关 关闭稳压电源开关 并在仪器使用登记本上记录环境温度、湿度、仪器工作状态及使用情况 结束操作，整理实验台;流动相 ：1、 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围； 2、 水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质； ;色谱柱：;样品：;That’s all ! Thank you !