SDS-PAGE原理及结果分析技巧.pptVIP

* * 同一目的蛋白，上样量大条带宽，分析值偏低。 * * 第一页，编辑于星期一：二十一点 二十一分。 聚丙烯酰胺凝胶 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体（acrylamide,Acr）和交联剂N’N’-甲叉双丙烯酰胺（methylene-bisacrylamide, Bis）以29:1的比例在聚合剂过硫酸铵(ammonium persulfate，APS)和催化剂TEMED的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。 优点： 凝胶孔径可调节（改变单体和交联剂的浓度），因此可根据被分离物的分子量范围选择合适的浓度 灵敏度可达1mg 分辨率高，可分离大小相差仅3%的多肽。尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体 无电渗作用，只要纯度高，操作条件一致，样品分离重复性好 凝胶透明，有弹性，机械效能好 化学性能稳定，与分离物不发生化学反应; 对pH和温度变化较稳定 第二页，编辑于星期一：二十一点 二十一分。 PAGE 电泳原理 分子筛效应: 分子大小和形状 电荷效应：大部分的蛋白质在pH8.3电泳缓冲液的条件下带有负电荷，表面负电荷多的蛋白质迁移快，反之则慢 （强阴离子去污剂SDS使蛋白结构松散，并带上大量负电荷，导致本身电荷差别消失，因此SDS分离蛋白主要依赖分子大小，而非电荷或形状） 不连续系统具有对样品的浓缩效应 pH值的不连续 缓冲液离子成分的不