鲤IFN-γ基因原核表达载体构建与蛋白纯化 .docVIP

PAGE 鲤IFN-γ基因原核表达载体构建与蛋白纯化 PAGE 15 摘 要 [目的]构建鲤IFN-γ原核表达载体并纯化表达产物。[方法]以鲤脾脏组织的cDNA为模板PCR扩增IFN-γ基因,经酶切连接表达载体pTWIN1后转化入大肠杆菌E. coli BL21感受态细胞中,利用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达及优化,利用SDS凝胶电泳,考马斯亮蓝R-250进行染色,检测pTWIN1-ifn-γ的表达情况。通过几丁质亲和层析进行纯化,最后通过SDS电泳分析验证。[结果]PCR成功扩增IFN-γ基因,双酶切及测序结果表明pTWIN1-IFN-γ原核表达载体构建成