柱色谱分离实验.ppt

编辑ppt 编辑ppt 柱 色 谱 Column Chromatography 了 解： 1. 柱色谱法分离有机物的原理。 2．固定相和流动相的选择原则。 掌 握： 1. 色谱柱的填充方法。 2．柱色谱分离的基本操作。 一、实 验 目 的 色 谱 法 简 介 色谱法亦称色层法，层析法等，是分离，纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一，还可定量分析。 色谱法分类 固定相、流动相的物理状态 操作形式 分离原理 液—固色谱法 气—固色谱法 气—液色谱法 液—液色谱法 柱色谱法（column chromatography） 薄层色谱法（TLC） 纸色谱法（paper chromatography） 气相色谱（GC） 高效液相色谱（HPLC） 吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 排阻色谱 操作形式 柱色谱法（column chromatography） 二、实 验 原 理 柱色谱分离示意图 混合物 吸附剂(固定相) 洗脱剂(流动相) 二、实 验 原 理 二、实 验 原 理 吸附剂的性质：均匀、表面积大、不反应、吸附能力不同 化合物的结构：化合物的吸附性和它们的极性成正比 洗脱剂的极性：溶解度适中、不反应、易获取回收 影响分离效果主要因素 和 和 在氧化铝柱子上若分离下列各组混合物，哪一个组分先被洗脱下来？ 三、实 验 内 容 装柱 加样 洗脱 收集 鉴定 干法：10g 硅胶 +乙醇 先用乙醇 后用水 操作 组分颜色 组分颜色 1mL样品 加样操作 0.5mL×2乙醇洗涤 柱色谱操作： 实 验 步 骤: 吸附剂装填紧密，排除气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面，无断层。 干法装柱 湿法装柱 装 柱 三、实 验 内 容 装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝，否则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影响样品的分离，应用质软的物体如吸耳球等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排除气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面． 样品为液体，可直接加样；样品为固体，可选择合适溶剂溶解为液体再加样。加样时，要沿管壁慢慢加入至柱顶部，勿使样品搅动吸附剂表面。 加 样 三、实 验 内 容 洗 脱 在柱顶不断加入洗脱剂，使洗脱剂永远保持有适当的量，不要让洗脱剂表面流干，使流动相流速适当。 三、实 验 内 容 洗脱时应注意： （1）向柱内加入95%乙醇溶液洗脱（可以通过注射器沿管壁或安装滴液漏斗）在恒压或加压条件下进行洗脱。控制流出速度1滴/秒。逐渐出现色层带分离。 （2）第一色层带到达色谱柱底部时，立即用锥形瓶收集第一色层的溶液，直到其完全被洗出。【注意】洗脱时切勿使溶剂流干！ （3）然后，改用水溶液作为洗脱剂，当第二色层带到达色谱柱底部时，立即收集第二色层的的溶液，直到其完全被洗出。 （4）用量筒分别量取所分离出来的两种溶液的体积后，倒入指定的回收瓶中。 （5）分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸耳球从活塞 向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出。使用过的吸附剂倒入垃圾桶里。 试样有色，在层析柱上可直接观察。洗脱后分别收集各个组分。 收 集 试样无色，收集洗脱液时，多采用等份收集，每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样的分离情况而定。收集的每份洗脱剂的体积越小，分离效果越好。 三、实 验 内 容 三、实 验 内 容 鉴 定 试样有色 依据颜色直接鉴定 试样无色 可结合薄层色谱结果 玻砂防堵塞 装柱需紧密 加压不可大 溶剂勿流干 四、注 意 事 项 * * 编辑ppt 色谱法亦称色层法、层析法等，是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。色谱法首创于1903年，是俄国植物学家茨维特首次成功地用于植物色素的分离。将色素溶液流经装有吸附剂的柱子，结果在柱的不同高度显出各种色带，而使色素混合物得到分离。色层分析由此而得名。 色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质(固定相)中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能的差异，当混合物的溶液(流动相)流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。 化合物的吸附性和它们的极性成正比，化合物分子中含有极性较大的基团其吸附性较强。 常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭等。 选择吸附剂的首要条件： 1. 有大的表面积和一定的吸附能力； 2. 颗粒均匀，不与被分离物质发生化学作用； 对被分离的物质中各组份吸附能力不同。 吸附能力与以下几点有关： 1. 吸附剂颗粒大小 吸附剂含水量 洗脱剂（溶剂）通常根据被分