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人B淋巴细胞表面抗原酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 96T本试剂盒仅供研究使用。 96T 检测范围: 5 pg/ml - 125pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 B淋巴细胞表面抗原含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人 B淋巴细胞表面抗原水平。用纯化的人 B淋 巴细胞表面抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 B淋巴细胞表 面抗原，再与 HRP标记的B淋巴细胞表面抗体结合，形成抗体 -抗原-酶标抗体复合物，经 过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转 化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 B淋巴细胞表面抗原呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（0D值），通过标准曲线计算样品中人 B淋巴细胞表面抗原浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml X 1 瓶 7 终止液 6ml X 1 瓶 2 酶标试剂 6ml X 1 瓶 8 标准品（240pg/ml） 0.5ml X 1 瓶 3 酶标包被板 12孔X 8条 9 标准品稀释液 1.5ml X 1 瓶 4 样品稀释液 6ml X 1 瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml X 1 瓶 11 圭寸板膜 2张 6 显色剂B液 6ml X 1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 1 ?标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于 -20 C保存，但应避免反复冻融 不能检测含 NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支， 用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 120pg/ml 5号标准品 150 d 的原倍标准品加入150 d标准品稀释液 60pg/ml 4号标准品 150 d 的5号标准品加入150 d标准品稀释液 30pg/ml 3号标准品 150 d 的4号标准品加入150 d标准品稀释液 15pg/ml 2号标准品 150 d 的3号标准品加入150 d标准品稀释液 7.5pg/ml 1号标准品 150 d 的2号标准品加入150 d标准品稀释液 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂， 其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50山,待测样品孔中先加样品稀释液 40山, 然后再加待测样品10 d （样品最终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 温育：用封板膜封板后置 37 C温育30分钟。 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 加酶：每孔加入酶标试剂 50 d，空白孔除外。 温育：操作同3。 洗涤：操作同5。 显色：每孔先加入显色剂 A50 d，再加入显色剂 B50 d，轻轻震荡混匀，37 C避光显色 15分钟. 终止：每孔加终止液 50 d，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 准备试剂，样品和标准品 计算 以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式， 将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值 大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（X nX 5）O 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 . 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9?本试剂不同批号组分不得混用。 10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 试剂盒保存：；2-8Co 有效期： 6 个月