酵母双杂交实验流程.docxVIP

精品文档 精品文档 PAGE PAGE #欢迎下载 精品文档 精品文档 PAGE PAGE #欢迎下载 模块七 蛋白质之间的相互作用 实验目的 本实验以重组质粒和酵母细胞为材料， 学习检测蛋白质相互作用的基本原理和技术方法。 主要介 绍酵母双杂交的基本原理与操作技术； 让学生了解和掌握酵母双杂交系统的应用； 掌握酵母感受态的 制备的基本原理和主要的操作步骤。 实验原理 1989年Fields和Song等人根据当时人们对真核生物转录起始过程调控的认识（即细胞内基因 转录的起始需要转录激活因子的参与） ，提出并建立了酵母双杂交系统。该系统作为发现和研究活细 胞体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技术平台，近几年得到了广泛的运用和发展。 相比于其它蛋白质筛选系统，酵母双杂交系统具有以下优点： （1）检测在真核活细胞内进行，在 一定程度上代表细胞内的真实情况。 （2）作用信号是在融合基因表达后，在细胞内重建转录因子的作 用而给出的，省去了纯化蛋白质的繁琐步骤。 （3）检测结果是基因表达产物的积累效应，因而可检测 存在于蛋白质之间的微弱或暂时的相互作用。 （4）酵母双杂交系统可采用不同组织、器官、细胞类型 和分化时期材料构建 cDNA文库，能分析细胞质、细胞核及膜结合蛋白等多种不同亚细胞部位及功能 蛋白。（5）通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大。同时，酵母表型、 X-