蛋白质化学PPT课件.ppt

第四章蛋白质的化学;学习内容;第一节 蛋白质是生命的物质基础;二、蛋白质在生命中的重要性;1.蛋白质是生物体内必不可少的重要成分; 2.蛋白质是一种生物功能的主要体现者;第二节 蛋白质的化学组成;二、蛋白质结构的基本单位;氨基酸的结构特点:;2.常见的氨基酸（20种）;3.氨基酸的分类（按侧链R基团的结构和性  质）;①非极性、疏水性氨基酸（非极性R基氨基酸） ;② 极性、中性氨基酸（极性不带电荷的R基氨基酸） ;③酸性氨基酸（含有两个羧基） ;④碱性氨基酸（含有???个以上氨基）;稀有氨基酸;第三节 蛋白质的分子结构;一.蛋白质的基本结构形式;肽平面（Peptide unit）:由肽键中的四个原子和与之相邻的两个碳原子组成的刚性平面（…CαCONHCα …）。;二硫键：由两分子半胱氨酸残基的巯基脱氢而成的。;2.肽分类、命名;多肽链的特点：具有方向性，N端 C端 ;二、蛋白质的一级结构 （primary structure）;1.氨基酸组成分析;2.氨基酸排列顺序分析;（1）二硝基氟苯法（DNFB）;（2）Edman 降解法; 三.蛋白质的构象 （conformation）;（一）维持蛋白质构象的化学键;维持蛋白质构象的主要次级键;（二）蛋白质的二级结构;1. 肽单位（peptide unit）;肽单位的特性：;2. α螺旋（ α-helix）;α螺旋的特征：;3. β-折叠（β-pleated sheet）;β-折叠的结构特征;;4.β-转角（β-bend或β-turn）;5.无规线团（random coil）;（三）超二级结构（super-secondary structure）;（四）结构域（domain）;（五）蛋白质的三级结构  （tertiary structure）;（六）蛋白质的四级结构 （quaternary structure）;小结;各级构象的隶属关系;第四节 蛋白质的结构与功能;分子疾病（molecular disease）;蛋白质构象疾病;第五节 蛋白质的性质;一.蛋白质分子的大小，形状及分子量  的测定;二.蛋白质的变性;2.变性作用的特征：;三、 蛋白质的两性电离与等电点;蛋白质的等电点（isoelectric point , pI）;四、蛋白质的胶体性质??;六、蛋白质的颜色反应;双缩脲反应 酚试剂反应 ;七、蛋白质的免疫学性质;免疫反应 抗原与抗体结合所引起的反应 --正常情况下，起保护作用。 --异常情况下，组织损伤和功能紊乱。（变态反应或过敏反应） 蛋白免疫性质的应用 ①疾病预防 ②诊断 ③治疗 ④免疫分析 ⑤分离纯化 ⑥标记免疫分析。 ; 乙肝 ??两对半”; 第六节 蛋白质的分离与纯化;;电泳（electrophoresis） 蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场泳动而达到分离各种蛋白的技术，称为电泳。 *SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 测定蛋白质的分子量。 *等电聚焦电泳 通过蛋白质的等电点的差异分离蛋白。 *双向凝胶电泳 蛋白质组学的重要技术工具。 ;层析（chromatography） 待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。 *凝胶过滤（gel filtration）又称分子筛层析，利用蛋白质分子大小不同分离。 *离子交换层析：利用各蛋白质的电荷量和性质不同进行分离。;蛋白质含量的测定;BCA 比色法 测定原理：在碱性溶液中，蛋白质将Cu2+还原为Cu+再与BCA试剂（4，4，-二羧酸-2,2,-二喹啉钠）生成紫色复合物，于526nm有最大吸收，其强度与蛋白质浓度成正比。 优点：单一试剂；终产物稳定；几乎没有干扰物质影响。 灵敏度范围：10～1200ug/ml。 ;Bradford法 测定原理：基于考马斯亮蓝G-250有红蓝两种不同的颜色的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下，可配成淡红色的溶液，当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物。于595nm测定光吸收值，可计算出蛋白质浓度。 优点：快速简便，10分钟左右完成。 灵敏度范围：25～200ug/ml。;谢谢！;