活性多肽简介.pptxVIP

1; ; ; ; ; ;第6页/共27页; ; ; ; ; ;将酪蛋白配成一定浓度的溶液后，用2mol／L的NaOH调至左右，加人一定量的胰蛋白酶进行水解，水解过程始终保持溶液pH在～之间，终止水解时加人1mol／LHcl使溶液pH达．然后离心除去沉淀，在上清液中加人10mL CaC12溶液至终浓度为100mmol／L，再加入等体积的乙醇，离心收集沉淀，最后将沉淀用丙酮、乙醚洗涤后挥发干燥，即得CPPs的复杂混合物;RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基键合硅胶，典型的流动相是甲醇和乙腈。RP-HPLC是当今液相色谱的最主要的分离模式，几乎可用于所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物的分离。 反相色谱法适于分离非极性、极性或离子型化合物，大部分的分析任务皆由反相色谱法完成。;取不同体积的样品进行试验，考察进样量对于分离的影响。当进样体积为 200- - 300μL 时，样品能达到较好的分离;采用选择性更高的乙酸铵洗脱液代替三氟乙酸洗脱液，对a1、a2、a3 收集液再进行第二次分离 。;第16页/共27页;阴离子树脂纯化 CPP;第18页/共27页;阳离子树脂纯化 CPP 原理：CPP在一定pH下带负电, 而NPP带正电. 将一定浓度的CPP进样 , 带正电的 NPP 被吸附于阳离子树脂上, 用清水将未被吸附的CPP洗出 , 得到CPP 洗脱液 .;用阴离子树脂纯化 CPP , 虽然达到了较好的分离效果 , 但从工业化规模生产 CPP 高纯品的角度来看 , 采用该法也有不 足之处 : 1)树脂在使用前和再生时需转型处理 , 能耗费 用较大 , 生产效率降低 . 2)总的分离时间较长 , 且操作分为两步 , 不利 于扩大生产 . 3)洗脱时使用的是一定浓度的 HCl , 使最终产 品带入了一定的盐分 . 4)从柱中洗脱下来的 CPP 溶液浓度很低 , 后 期浓缩干燥能耗费用较大 ;使用阳离子树脂纯化 CPP 有如下优点 : 1)阳离子树脂使用前无需转型处理 . 2)用阳树离子树脂纯化洗脱 CPP 只需一步 ,总操作时间只有采用阴离子树脂时的一半 . 3)用阳离子树脂纯化时洗脱用的是清水 , 未带入盐分 . 4)从交换容量的角度来看 , 在确保 r (N/ P) 5. 5 的前提下 , 还可通过提高进样浓度来进一步提高得率 , 这样洗脱液中 CPP 的浓度就可以提高 , 减 少了后面浓缩和干燥的费用 ; ;CPPs是多种短肽的混合钧，其中大部分肽中含有成簇的磷酸丝氨酸序列 (-Serp— Serp-Serp-Glu-Glu-)，这一序列也正是CPPs的功能基团，其含量的多少与 CPPs功能特性直接相关．因此，肽链较短，磷酸丝氨酸基团较多的CPPs其持钙能力最强．而cPPs中磷和氮含量的比值(P／N)能较客观地反映CPPs链长和磷酸基的密度，可作为评价CPPs产品特性的重要指标。 ; ;第25页/共27页;