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westernblot 原理及步骤 免疫印迹（ Western Blot ）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知 表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分 的抗体检测。 Western Blot 是检测单一细胞蛋白表达量最好的方法；若要对表达蛋白 进行细胞定位， confocal 应是首选的方法，若要进行蛋白相互作用的关系，应考虑免 疫共沉淀技术。 一、 Western Blot 的原理 Western Blot 与 Southern 或 Northern 杂交方法类似，但 Western Blot 采用的是聚 丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。 经过 PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载 体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。 以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素 标记的第二抗体起反应， 经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基 因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 二、操作步骤